紅斑丹毒絲菌GAPDH等分子致病作用研究及DNA聚合酶IV診斷標識驗證.pdf

1、紅斑丹毒絲菌是造成動物丹毒病和人類類丹毒病的病原體。所有動物丹毒病中豬丹毒的經(jīng)濟意義最大。目前研究認為紅斑丹毒絲菌對血管內(nèi)皮細胞的粘附是感染發(fā)病起始環(huán)節(jié)的關鍵，但是紅斑丹毒絲菌的毒力因子和致病機制依然不很清楚。本研究比較系統(tǒng)地研究了紅斑丹毒絲菌致病表型。研究了GAPDH等5個紅斑丹毒絲菌表面蛋白的致病作用，評估了這5個蛋白作為保護性抗原的潛質(zhì)。最后，建立和改進了區(qū)分紅斑丹毒絲菌疫苗菌株和野生型菌株的方法。
　　本研究結(jié)果表明:紅斑

2、丹毒絲菌可以粘附血管內(nèi)皮細胞，且強毒菌株表現(xiàn)出更高的粘附活性。紅斑丹毒絲菌不能直接損傷血管內(nèi)皮細胞。紅斑丹毒絲菌能夠利用宿主的血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白，強毒菌株表現(xiàn)出更高的招募活性。紅斑丹毒絲菌具有抵抗全血殺傷能力且強毒菌株表現(xiàn)出更強的抵抗能力。紅斑丹毒絲菌強毒菌株的占優(yōu)勢的免疫反應是Th1型反應。
　　本研究克隆、表達、純化了5個紅斑丹毒絲菌表面蛋白:SpaA、CbpB、GAPDH、HP0728、HP1472。研究結(jié)果

3、顯示它們都定位于紅斑丹毒絲菌菌體表面。我們的研究結(jié)果顯示表面蛋白SpaA、CbpB、GAPDH、HP1472可以在紅斑丹毒絲菌粘附血管內(nèi)皮細胞中發(fā)揮粘附素作用。SpaA、CbpB、GAPDH、HP0728可以在紅斑丹毒絲菌招募宿主血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白中發(fā)揮受體作用。
　　本研究結(jié)果表明SpaA、CbpB、GAPDH是紅斑丹毒絲菌的保護性抗原，免疫HP0728和HP1472不能為小鼠提供保護力。GAPDH抗血清能夠降低

4、紅斑丹毒絲菌粘附豬血管內(nèi)皮細胞的能力，能夠促進全血對紅斑丹毒絲菌的殺傷能力，但是不能抑制紅斑丹毒絲菌招募血漿纖維蛋白溶解酶原和纖維連接蛋白。GAPDH抗血清能夠結(jié)合豬鏈球菌菌體和多殺性巴氏桿菌菌體，但是免疫重組紅斑丹毒絲菌GAPDH沒有保護小鼠免受兩種病原體的致死劑量感染。
　　本研究修正了日本學者建立的基于SNP的區(qū)分紅斑丹毒絲菌疫苗菌株和野生型菌株的PCR方法，基于DNA聚合酶Ⅳ的差異，建立了既能夠鑒定紅斑丹毒絲菌臨床分離株又

5、能夠同時區(qū)分豬丹毒疫苗菌株和野生型菌株的雙重PCR方法。
　　總之，本研究首次明確紅斑丹毒絲菌對豬血管內(nèi)皮細胞的損傷是間接損傷并研究了幾種可能的機制，首次測定紅斑丹毒絲菌的免疫反應類型，報道紅斑丹毒絲菌具有招募宿主血漿纖維蛋白溶解酶原的表型并發(fā)現(xiàn)了幾個該過程中可能的受體，首次通過實驗證實兼職蛋白在紅斑丹毒絲菌感染中可能發(fā)揮作用，首次發(fā)現(xiàn)GAPDH是紅斑丹毒絲菌的保護性抗原，建立能夠鑒定豬丹毒臨床分離株同時區(qū)分豬丹毒疫苗菌株和野生型