腹腔內(nèi)注射不同劑量異丙酚對大鼠腦內(nèi)中樞Fos蛋白表達的影響.pdf

1、背景和目的:全身麻醉的發(fā)展歷史大約已經(jīng)有160多年，關(guān)于全身麻醉藥作用機制的研究一直是麻醉學(xué)科的重點、難點項目，但是全身麻醉的機理尚不明確，靜脈全麻藥在人體的作用位點、怎樣作用等問題至今也不明確。
　　 丙泊酚是靜脈全身麻醉藥物的一種，是一種新型短效的靜脈麻醉藥，其誘導(dǎo)速度迅速、蘇醒快且安全，連續(xù)輸注無體內(nèi)蓄積作用，現(xiàn)在已廣范圍應(yīng)用于麻醉誘導(dǎo)及麻醉維持中，也常用于ICU病房的鎮(zhèn)靜等，但其導(dǎo)致意識消失的機制尚不明確。
　　

2、 多數(shù)學(xué)者認為腦是異丙酚作用的主要部位，但其作用的具體位置還需要進一步研究；在全身麻醉狀態(tài)下機體中樞神經(jīng)的許多功能被抑制，然而神經(jīng)系統(tǒng)的某些區(qū)域仍處于功能活躍狀態(tài)，表明腦內(nèi)存在著與全身麻醉藥作用的敏感靶位；隨著麻醉技術(shù)的不斷發(fā)展，近年來人們發(fā)現(xiàn)即刻早期基因c-Fos，在中樞區(qū)域可因刺激而立即進行轉(zhuǎn)錄為c-Fos mRNA，翻譯生成Fos蛋白返回核內(nèi)調(diào)節(jié)其他靶基因，參與重要腦功能活動的信號傳導(dǎo)和調(diào)控過程，現(xiàn)在已經(jīng)是一種腦功能活動形態(tài)學(xué)定位

3、標記物。
　　 本研究，通過在大鼠腹腔注射不同劑量的異丙酚，觀察其行為學(xué)的改變，并用麻醉深度評分標準打分，采用免疫組化法，通過對全麻狀態(tài)下檢測基因表達產(chǎn)物Fos蛋白的研究，進一步探討異丙酚作用機制以明確其在靜脈全身麻醉中的相關(guān)敏感靶位。
　　 材料與方法:選擇健康、足月、雄性SD大鼠64只，體重200-240g，由河南省動物實驗中心提供，隨機分為8組(n=8)：對照組(C1組、C1D組)、異丙酚組(P1組、P2組、P3組

4、、P1D組、P2D組、P3D組)。C1組即SD大鼠腹腔注射生理鹽水+DMSO2ml、P1組即SD大鼠腹腔注入異丙酚30mg/kg、P2組即SD大鼠腹腔注入異丙酚75mg/kg、P3組即SD大鼠腹腔注入異丙酚120mg/kg、C1D組即SD大鼠腹腔注射生理鹽水+DMSO2 ml后5.5min斷尾、P1D組即SD大鼠腹腔注入異丙酚30mg/kg后5.5min斷尾、P2D組即SD大鼠腹腔注入異丙酚75mg/kg后5.5min斷尾、P3D組即S

5、D大鼠腹腔注入異丙酚120mg/kg后5.5min斷尾；然而，觀察各組腹腔注射生理鹽水、藥物后5.5min及5.5min斷尾時，30min，1h時大鼠的呼吸及行為學(xué)的改變，并用麻醉深度評分標準打分；腹腔注射生理鹽水、藥物后1.5小時，各組斷頭取腦組織，應(yīng)用Fos蛋白免疫組織化學(xué)法(ABC法)，檢測Fos免疫反應(yīng)(Fos-IR，immunity reaction of Fos)陽性神經(jīng)元在大鼠腦區(qū)的分布；觀察腹腔注射不同劑量異丙酚的鎮(zhèn)靜、

6、鎮(zhèn)痛作用及其量效關(guān)系。實驗前將大鼠放置在室溫為20℃的安靜環(huán)境中飼養(yǎng)24 h以上，以消除強光、噪音等額外刺激。
　　 統(tǒng)計處理:實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS12.0軟件分析數(shù)據(jù)，組間、組內(nèi)比較采用時間序列的方差分析，兩兩比較采用q檢驗，計數(shù)資料采用x2檢驗；檢驗水準為a=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1.行為學(xué)評分結(jié)果：C1、C1D組腹腔注射生理鹽水后，大鼠意識清醒，活動沒有受限評分為0。

7、P1組，5.5min，30min，1h時評分為4分，則均處于輕度鎮(zhèn)靜；P1D組，5.5min時評分為2分，處于警覺狀態(tài)，30min、1h時評分為4分，均處于輕度鎮(zhèn)靜；P2組5.5min時評分為10分，處于過渡狀態(tài)；30min為13分，達適度麻醉，1h時評分10分則處于過渡狀態(tài)；P20組5.5 min評分為5分，處于輕度鎮(zhèn)靜；30min時評分為6分，處于過渡狀態(tài)，1h時評分為5分，處于輕度鎮(zhèn)靜；P3組5.5min時評分為13分，大鼠達適度

8、麻醉，30min時評分為15分達深麻醉，1h時評分為10分，則處于過渡狀態(tài)；P3D組，5.5min時評分為10分，達過渡狀態(tài)；30 min時評分為14分，大鼠達適度麻醉；1 h時評分為10分則處于過渡狀。
　　 2.實驗發(fā)現(xiàn)：C1組大鼠皮層、海馬可見少量散在分布的Fos-IR陽性神經(jīng)元。P1組、P2組、P3組大鼠中樞Fos-IR陽性神經(jīng)元表達較C1組大鼠明顯增多，且呈強陽性表達，且Fos-IR陽性細胞核呈棕黑色，主要分布在皮層，

9、海馬、杏仁核、丘腦室旁核、下丘腦室旁核，與C1組比較有顯著差異性，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，且大鼠中樞Fos-IR陽性神經(jīng)元表達與異丙酚劑量呈劑量依賴性，P3組與P1組、P2組比較有顯著差異性，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P2組與P1組比較有顯著差異性，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。提示皮層、海馬、杏仁核、丘腦室旁核、下丘腦室旁核等核團為異丙酚在大鼠中樞的麻醉作用位點。C1D組、P1D組、P2D組、P3D組大鼠中樞Fos-IR陽性神經(jīng)元呈強陽性表達，F(xiàn)os-I

10、R陽性細胞核呈棕黑色，在皮層、海馬較C1組表達明顯增多，C1D組主要分布杏仁核、丘腦室旁核，P1D組、P2D組、P30組主要分布在丘腦室旁核、杏仁核及皮層、海馬、下丘腦室旁核；且在杏仁核、丘腦室旁核部位C1D組、P1D組、P2D組、P3D組各組間Fos-IR陽性表達比較無差異，無統(tǒng)計學(xué)意義，但以上各組分別與P1、P2、P3比較均有顯著差異性，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示丘腦室旁核、杏仁核可能參與大鼠中樞對斷尾刺激的反應(yīng)；在下丘腦室旁核，C1

11、組即生理鹽水組功能性刺激，在此核團Fos蛋白不表達，C1D組即傷害性刺激組Fos蛋白也不表達，只有異丙酚作用的各組在此有Fos蛋白表達，提示下丘腦室旁核是異丙酚較為特異作用位點。
　　 結(jié)論:
　　 1.30mg/kg劑量以上的異丙酚具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛作用，且與異丙酚劑量呈劑量依賴性；
　　 2.大鼠腦內(nèi)皮層、海馬、下丘腦室旁核、丘腦室旁核、杏仁核Fos核蛋白表達與異丙酚劑量呈劑量依賴性；且下丘腦室旁核是異丙酚較特異