異丙酚單次劑量靜脈注射在犬腦的攝取和分布.pdf

1、腦是靜脈麻醉藥的效應器官，了解靜脈麻醉藥腦內(nèi)藥動學和藥效學規(guī)律對于指導臨床合理用藥有重要的意義，靜脈麻醉藥腦攝取研究即由此發(fā)展而來。異丙酚為臨床重要的靜脈麻醉藥，是當前腦攝取研究的主要對象。 Upton等首先明確提出了腦攝取概念，論述了研究的基本設想-質(zhì)量平衡法則(mass balance principles)：即通過對腦循環(huán)動、靜脈血中異丙酚濃度的測定和計算，間接反映異丙酚全腦攝取情況。目前的異丙酚腦攝取研究主要基于質(zhì)量平衡

2、法則，這些研究揭示了腦內(nèi)異丙酚藥動學和藥效學的部分規(guī)律，指導了以效應室為目標的異丙酚TCI等臨床應用。由于實驗方法的限制和腦功能的特殊性，基于質(zhì)量平衡法則的異丙酚腦攝取研究不能反映腦組織對異丙酚的實際攝取和異丙酚腦分布情況，難以明確地反映異丙酚腦攝取隨時間變化的具體過程。為克服這些不足，必須改變現(xiàn)有的實驗方法。 解剖異丙酚麻醉狀態(tài)下的動物腦并直接測量腦組織中異丙酚濃度，此方法是對既往基于質(zhì)量平衡法則的腦攝取間接研究的改進。此類研

3、究極少，目前僅由Shyr和Larsson分別以SD大鼠腦為實驗對象進行了初步探索。實驗結(jié)果首次展示了腦中異丙酚的真實濃度及其分布情況。shyr實驗中異丙酚在鼠腦內(nèi)分布均衡，而Larsson實驗指出異丙酚在腦內(nèi)分布情況與注射速度和鼠齡有關。二者實驗關于異丙酚腦分布的結(jié)論相異，異丙酚腦分布特征有待進一步研究。鼠腦結(jié)構(gòu)和功能與人腦差別較大，難以對實驗結(jié)果進行推廣，有必要對更高等的動物加以研究。對異丙酚中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用的研究已經(jīng)取得了一些進展，

4、但目前仍不能闡明其全麻作用機制。相當多的研究表明中樞6ABA<,A>受體可能在異丙酚對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制中發(fā)揮重要作用。據(jù)此，人們提出了異丙酚全麻作用機制的中樞6ABA<,A>受體學說，然而受當前受體研究水平的限制，對此學說的論證基本陷于停滯。異丙酚PET腦功能研究表明在異丙酚作用下不同腦區(qū)的葡萄糖代謝、區(qū)域腦血流變化有顯著的差異，說明異丙酚不同腦區(qū)的作用不一致。由于技術手段尚不成熟，目前PET全麻機制研究的結(jié)論差異較大，所得出的腦功能

5、抑制區(qū)域分布與中樞GABA<,A>受體的分布規(guī)律有出入，不能對異丙酚GABA<,A>受體學說提供有力佐證。因此有必要開拓新的異丙酚全麻作用機制研究思路，探索異丙酚腦攝取和腦分布特征對于其全麻作用機制研究可能有所助益。如果不同腦區(qū)對異丙酚的攝取不同，則可以對異丙酚在腦內(nèi)的作用差異現(xiàn)象作出部分解釋。如果某些腦組織對異丙酚的攝取顯著高于其它腦組織，則這些區(qū)域可能是異丙酚作用的主要部位，對其進行深入研究可能有助于揭示異丙酚全麻作用機制。

6、 異丙酚在臨床中通常與鎮(zhèn)痛藥等麻醉藥物聯(lián)合應用，尚無證據(jù)表明異丙酚腦攝取和腦分布是否受到這些藥物的影響，這一問題對于指導異丙酚臨床應用有意義。研究表明舒芬太尼能影響異丙酚TCI效應室濃度及其清除、分布規(guī)律。舒芬太尼在腦內(nèi)分布不一致，PET研究表明舒芬太尼在腦內(nèi)作用有區(qū)域選擇性，其它研究也顯示舒芬太尼對腦代謝和腦血流有顯著的影響。異丙酚腦攝取受區(qū)域腦血流等腦功能狀況的影響，因此推測舒芬太尼對異丙酚腦攝取和腦分布有影響，目前還沒有研究涉及于

7、此。 本研究解剖異丙酚單次劑量靜脈注射全麻狀態(tài)下的犬腦，測量犬腦不同組織中異丙酚濃度，探索基于解剖、直接測量技術的異丙酚腦攝取研究的可行性，希望了解不同腦組織對異丙酚攝取的規(guī)律是否一致。同時根據(jù)異丙酚腦分布特征結(jié)合其它研究的成果探討異丙酚可能的全麻作用機制。選擇舒芬太尼為干擾藥物，觀察在小劑量舒芬太尼作用下犬腦不同組織中異丙酚的濃度變化，以對異丙酚腦攝取和腦分布受其它麻醉藥物影響的規(guī)律進行初步探索。 為達到研究目的，本研

8、究改進了異丙酚腦組織濃度和血漿濃度的測量方法，建立了HPLC-UV-沉淀法。材料和方法1 實驗動物準備與分組： 12只周歲雄性健康犬，體重10-12kg。隨機分為兩組：A組(異丙酚組)和B組(異丙酚+舒芬太尼組)。實驗時由右后肢大隱靜脈建立靜脈通路并保持通暢。 2 麻醉實施： A組：異丙酚7mg·kg<'-1>靜脈注射，注射時間為15s。預定麻醉狀態(tài)為眼瞼反射和踏板反射消失。 B組：舒芬太尼1μg·kg<

9、'-1>靜脈注射后，立即注入異丙酚7mg·kg<'-1>，注射時間為15s。預定麻醉狀態(tài)為眼瞼反射和踏板反射消失。 3 標本采集： 達到預定麻醉狀態(tài)后解剖犬右側(cè)頸內(nèi)動、靜脈，各取血2ml 快速注入抗凝管中，4℃冰箱中保存。斷頭法處死實驗犬。無菌條件下去除顱蓋等組織，專人解剖獲取額葉、頂葉、顳葉、海馬、扣帶回、丘腦、中腦、橋腦和小腦組織，-17℃低溫冰箱中保存。 4 標本處理： 血標本在4℃低溫離心機中離心

10、30min(10000r·min<'-1>)。取血漿200μl置于EP管中，加入乙睛400μl，渦旋器震蕩2min后再離心10min(10000r·min<'-1>)，取上清液于EP管中保存。 腦組織樣品精確稱量后置于勻漿器中，加入乙睛(2ml·g<'-1>)充分勻漿，勻漿液離心4min(10000r·min<'-1>)后取上清液于EP管中保存。 5 異丙酚色譜分析： 采用HPLC-UV-沉淀法測量異丙酚濃度，外

11、標物為異丙酚標準品。色譜柱為Dikma Diamonsil C<,18>柱(200mm×4.6mm，5μm)，柱溫4℃。流動相A為乙酸胺(1mmol·L<'-1>)和乙酸(1g·L<'-1>)，流動相B為甲醇，A：B為25：75。自動進樣量20μl，流速lml·min<'-1>，檢測波長270nm。 6 數(shù)據(jù)分析： 采用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計處理，計量資料以均數(shù)±標準差表示。組內(nèi)頸內(nèi)動脈和靜脈血漿異丙酚濃度比較采用

12、配對樣本t檢驗，組間異丙酚血漿濃度比較采用獨立樣本t檢驗。組內(nèi)腦組織異丙酚濃度比較采用配伍組設計資料的方差分析，多重比較采用SNK法。A組和B組相應腦組織異丙酚濃度比較采用獨立樣本t檢驗。P<0,05為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果 1麻醉狀況： 所有實驗動物均安全迅速地達到預定麻醉狀態(tài)并維持穩(wěn)定，無嘔吐、窒息、呼吸暫停等不良反應。 2 異丙酚血漿濃度： A 組頸內(nèi)動脈和頸內(nèi)靜脈血漿異丙酚濃度分別為11.

13、711±1.634、5.424±0.802μg·ml<'-1>，二者差異有統(tǒng)計學意義(差值=6.287±0.878，t=17.545，P<0.001)。 B 組頸內(nèi)動脈和頸內(nèi)靜脈血漿異丙酚濃度分別為11.100±1.585、5.444±0.780μg·ml<'-1>，二者差異有統(tǒng)計學意義(差值=6.256±0.840，t=18.244，P<0.001)。A組和B組頸內(nèi)動脈血漿異丙酚濃度差異無統(tǒng)計學意義(t=0.012，P=0.9

14、91)，兩組頸內(nèi)靜脈血漿異丙酚濃度差異也無統(tǒng)計學意義(t=0.044，P=0.996)。 3 異丙酚腦組織濃度： A組犬腦額葉、頂葉、顳葉、海馬、扣帶回、丘腦、中腦、橋腦、小腦異丙酚濃度分別為：8.102±1.238、8.076±1.316、8.296±1.853、5.596±0.747、8.344±1.871、10.977±2.998、8.555±1.464、8.488±1.353、7.931±1.104μg·g<'-

15、1>。各腦組織異丙酚濃度差異有統(tǒng)計學意義(F=18.175，P<0.001)，丘腦異丙酚濃度高于其它腦組織(P<0.05)，海馬低于其它腦組織(P<0.05)。 B組犬腦額葉、頂葉、顳葉、海馬、扣帶回、丘腦、中腦、橋腦、小腦異丙酚濃度分別為：8.154±1.542、8.125±1.572、8.330±1.906、5.605±0.729、8.351±1.738、11.055±3.325、8.634±1.944、8.574±1.90

16、2、7.968±1.323μg·g<'-1>。各腦組織異丙酚濃度差異有統(tǒng)計學意義(F=16.44l，P<0.001)，丘腦異丙酚濃度高于其它腦組織(P<0.05)，海馬低于其它腦組織(P<0.05)。 A組和B組間各個相應腦組織異丙酚濃度差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結(jié)論 1．HPLC-UV-沉淀法可成功用于對腦組織和血漿中異丙酚濃度的測定。 2．異丙酚單次靜脈注射達到全麻狀態(tài)即刻，異丙酚犬腦攝取未