PTEN在急性白血病的表達(dá)及其與SKP2、VEGF的相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的:白血病(leukemia)是最常見的造血系統(tǒng)腫瘤，其本質(zhì)是造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，特征為原始或幼稚細(xì)胞無限增殖，失去了正常的造血調(diào)控，并存在分化障礙、凋亡受阻。腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素、多階段的作用過程，抑癌基因的失活及異常與癌基因的激活被認(rèn)為是腫瘤的發(fā)生發(fā)展的重要事件。癌基因的激活、抑癌基因的突變及失活可導(dǎo)致細(xì)胞的增殖分化失控，增加細(xì)胞癌變的可能性。對(duì)于大多數(shù)腫瘤，尤其是白血病的發(fā)病及預(yù)后，癌基因的激活、抑癌基因的突變及

2、失活都起著基礎(chǔ)性的作用。因此將這些癌基因的激活、抑癌基因的突變及失活作為研究基礎(chǔ)進(jìn)行研究，有助于我們了解腫瘤發(fā)病的機(jī)制，有助于在分子水平上對(duì)腫瘤進(jìn)行診斷和治療，同時(shí)，有助于在分子水平上檢測(cè)治療的療效。抑癌基因的失活在腫瘤的發(fā)病和不良預(yù)后方面發(fā)揮著更為重要的作用。定位于染色體10q23.3的PTEN/MMAC1/TEP1(phosphataseandtensinhemologydeletedonchromosometen)基因是迄今為止發(fā)

3、現(xiàn)的第一個(gè)具有脂質(zhì)磷酸酶作用的抑癌基因。在大多數(shù)上皮細(xì)胞惡性腫瘤中已發(fā)現(xiàn)了PTEN表達(dá)的異常。目前，已有研究報(bào)道了PTEN在乳腺癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、惡性膠質(zhì)瘤及散發(fā)性黑色素瘤等各種實(shí)體瘤的缺失和突變。PTEN的表達(dá)異常在惡性膠質(zhì)瘤的晚期進(jìn)展中發(fā)揮了重要的作用，研究證實(shí)PTEN在大多數(shù)惡性腫瘤晚期存在DNA水平的異常。PTEN具有雙重磷酸酶活性，作為脂質(zhì)磷酸酶，特異性地使三磷酸肌醇激酶(PI3K/AKT)途徑的關(guān)鍵因子磷脂酰肌醇-3

4、，4，5-三磷酸(phosphatidylinositol-3，4，5-triphosphate,PIP3)的D3位去磷酸化，因此PTEN可通過負(fù)調(diào)控PI3K/AKT途徑來調(diào)節(jié)細(xì)胞的周期進(jìn)展、細(xì)胞凋亡和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。PTEN蛋白的氨基酸序列氨基端與輔助蛋白tensin蛋白和肌力蛋白auxilin蛋白高度同源，而張力蛋白與肌力蛋白的結(jié)合與細(xì)胞聚集黏附有關(guān)，影響細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移。SKP2及VEGF是已被廣泛證實(shí)的癌基因。已有研究證明PTEN

5、、SKP2及VEGF在急性白血病(AL)細(xì)胞中表達(dá)的異常，但PTEN在白血病的研究主要集中在白血病細(xì)胞株，而原代細(xì)胞的研究較少，且PTEN與SKP2、VEGF的相關(guān)性,PTEN與臨床特征的關(guān)系尚未見到報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)擬采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)初治的AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN蛋白、SKP2蛋白及VEGF蛋白的表達(dá)，分析PTEN的表達(dá)與SKP2、VEGF表達(dá)的相關(guān)性，同時(shí)分析PTEN與臨床特征的關(guān)系，探討PTEN、SKP2及VEGF蛋白水平

6、的異常在AL發(fā)病中的可能作用，從而探索急性白血病的治療新方法。 材料與方法:(1)所有樣本均取自2005年4月至10月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科門診及住院患者。(2)經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、組織化學(xué)和細(xì)胞免疫學(xué)確診的AL患者52例，年齡15-69歲(中位年齡40歲)。其中男35例，女17例；急性非淋巴細(xì)胞白血病(ANLL)36例(M02例,M11例,M221例,M34例，M42例,M55例,M61例)。急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)16例；

7、正常對(duì)照14例及完全緩解組(AL-CR)10例。分離單個(gè)核細(xì)胞后制備細(xì)胞滴片后采用免疫組織細(xì)胞化學(xué)染色方法用于檢測(cè)PTEN、SKP2及VEGF蛋白的表達(dá)。(3)所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，表達(dá)積分陽性率采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，用spearman進(jìn)行相關(guān)性分析；陽性細(xì)胞率及積分所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果:(1)初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)積分陽性率

8、為46.2％明顯低于AL-CR90％及正常對(duì)照92.9％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，ANLL和ALL骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)積分陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。初治ANLL、ALL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)細(xì)胞陽性率分別為(42.31±21.19)％、(41.06±17.03)％明顯低于AL-CR(66.70±26.58)％及正常對(duì)照(72.85±22.95)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，ANL

9、L和ALL骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)細(xì)胞陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。ANLL、ALL、AL-CR及正常對(duì)照組骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)積分分別為：3.02±1.50,3.18±1.60，4.50±2.01,4.92±2.16；ANLL、ALL和正常對(duì)照組兩兩之間比較，ANLL和ALL骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)積分低于正常對(duì)照組(p＜0.05)；ANLL、ALL和AL-CR組兩兩之間比較，ANLL和ALL骨髓單

10、個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)積分低于AL-CR組(p＜0.05)；ANLL和ALL比較，骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)積分無顯著性差異(p＞0.05)。 (2)在急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中,PTEN與VEGF的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.339，P＜0.05)，在急性白血病中，PTEN表達(dá)低時(shí)，VEGF的表達(dá)有增高的趨勢(shì)。 (3)在急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中，PTEN與SKP2的表達(dá)無明顯相關(guān)(P＞0.05)。

11、 (4)在急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中,PTEN蛋白的表達(dá)異常與患者的年齡、性別無明顯相關(guān)(P＞0.05)，而與外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及髓外浸潤呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。 結(jié)論:(1)初治AL組患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)明顯低于AL-CR組及正常對(duì)照組，提示PTEN的表達(dá)缺失在白血病的發(fā)生發(fā)展中起一定的作用。 (2)初治AL組患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中PTEN的表達(dá)異常與外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及髓外浸潤呈負(fù)相關(guān)，提示PTEN的