日本血吸蟲(chóng)表膜蛋白SjOST48的初步研究.pdf

1、日本血吸蟲(chóng)病是我國(guó)重點(diǎn)防控的人畜共患寄生蟲(chóng)病，對(duì)我國(guó)人民的身體健康和畜牧生產(chǎn)造成了重大損害。防治實(shí)踐表明吡喹酮只針對(duì)成蟲(chóng)有效且不能避免重復(fù)感染，單靠吡喹酮藥物治療不能有效控制血吸蟲(chóng)病，因此，篩選、鑒定高效且安全的血吸蟲(chóng)病疫苗成為血防工作者們的努力方向。體被表膜蛋白被證明是血吸蟲(chóng)潛在的疫苗和藥物靶標(biāo)，具有很好的研究?jī)r(jià)值。本實(shí)驗(yàn)室前期在開(kāi)展日本血吸蟲(chóng)體被蛋白組研究時(shí)鑒定到了SJCHGC01743蛋白，本文對(duì)該蛋白編碼基因進(jìn)行了克隆、表達(dá)，對(duì)

2、其基本特性和生物學(xué)功能進(jìn)行了初步的研究。
　　為了鑒定日本血吸蟲(chóng)SJCHGC01743基因并評(píng)估其重組蛋白作為新的血吸蟲(chóng)病候選疫苗抗原的潛力，本研究利用PCR技術(shù)首次擴(kuò)增了該基因，獲得了1248bp的cDNA序列。同源性分析結(jié)果顯示，該基因?yàn)槿毡狙x(chóng)寡糖轉(zhuǎn)移酶OST48亞基，命名為SjOST48。實(shí)時(shí)定量PCR分析顯示SjOST48在檢測(cè)的童蟲(chóng)和成蟲(chóng)各個(gè)期別蟲(chóng)體中均有轉(zhuǎn)錄，其中在28d蟲(chóng)體中的轉(zhuǎn)錄水平最高，在42d雌蟲(chóng)中的轉(zhuǎn)錄水

3、平顯著高于雄蟲(chóng)。構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)-SjOST48，并在大腸桿菌中成功表達(dá)，重組蛋白rSjOST48分子量約50kDa。應(yīng)用重組蛋白rSjOST48免疫BALB/c小鼠制備免疫血清，Western-blot分析表明rSjOST48具有較好的免疫原性。間接免疫熒光試驗(yàn)表明SjOST48蛋白主要分布于蟲(chóng)體體被，少量分布于實(shí)質(zhì)。ELISA檢測(cè)結(jié)果表明rSjOST48能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的特異性IgG、IgG1和IgG2a抗體。兩

4、次動(dòng)物免疫保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果表明SjOST48分別誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了21.58％-32.62％(P＜0.05)的減蟲(chóng)率和50.94％-57.61％(P＜0.01）的肝臟蟲(chóng)卵減少率。
　　為了探究SjOST48基因的生物學(xué)功能，本研究利用RNAi技術(shù)對(duì)該基因進(jìn)行了初步研究。根據(jù)SjOST48核苷酸序列，設(shè)計(jì)了4對(duì)針對(duì)該基因的特異性siRNAs，通過(guò)浸泡法進(jìn)行體外篩選，獲得一體外干擾效果較好的siRNAs(siRNA-713)，與無(wú)關(guān)對(duì)照組相比

5、，siRNA-713浸泡組SjOST48的轉(zhuǎn)錄水平下降了40.00％。利用尾靜脈注射法將siRNA-713導(dǎo)入感染血吸蟲(chóng)的小鼠體內(nèi)進(jìn)行體內(nèi)干擾實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，7次注射siRNA-713后，與無(wú)關(guān)對(duì)照組相比，siRNA-713干擾組小鼠體內(nèi)的蟲(chóng)荷數(shù)減少了29.50％,肝臟蟲(chóng)卵數(shù)減少了30.08％，表明日本血吸蟲(chóng)表膜蛋白SjOST48可能對(duì)血吸蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育具有重要作用。
　　本研究為深入探討日本血吸蟲(chóng)SjOST48基因的生物學(xué)功能及篩