
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文檔簡介
1、結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌所引發(fā)的一種傳染病,近年來,隨著人口流動增加、多重耐藥菌株的出現(xiàn)以及結(jié)核分枝桿菌與人類免疫缺陷病毒(HIV)的聯(lián)合感染,結(jié)核病對人類的健康形成日益嚴重的威脅??ń槊缱鳛轭A防結(jié)核病的唯一疫苗,其保護效力卻極不穩(wěn)定,因此越來越多的研究者致力于結(jié)核分枝桿菌疫苗的研制和開發(fā)領域,如毒力基因的研究、疫苗候選基因的篩選及其編碼產(chǎn)物免疫原性與免疫保護性的研究、以及對卡介苗的改造等。 結(jié)核分枝桿菌是一種胞內(nèi)致病菌,可以通過
2、多種機制逃避機體免疫細胞的殺傷及清除,從而在其宿主細胞——巨噬細胞中進行自我復制和繁殖,并長期存活于機體內(nèi)。當機體免疫能力下降時,潛伏的結(jié)核桿菌就會大量繁殖而導致結(jié)核病的發(fā)生。 現(xiàn)已證明,RD1區(qū)基因編碼的蛋白質(zhì)是結(jié)核分枝桿菌的主要毒力因子,在結(jié)核桿菌疫苗研制開發(fā)和檢測診斷方面都受到了廣泛的重視。PPE68蛋白由RD1區(qū)的Rv3873基因所編碼,是RD1區(qū)免疫原性的重要組成部分之一,可以在結(jié)核感染病人體內(nèi)誘發(fā)強烈的T淋巴細胞反應
3、。另外,PPE68做為PPE蛋白家族的成員,其特殊的結(jié)構(gòu)使其可能與結(jié)核分枝桿菌菌壁的高度疏水性及抗原變異有關,并極有可能在結(jié)核桿菌的致病機制中起到至關重要的作用。 組織纖溶酶原激活物(tPA)是一種分泌表達的蛋白質(zhì),將其分泌信號肽序列與目的DNA嵌合表達,可以增強后者所編碼蛋白質(zhì)的分泌表達、有利于機體抗原遞呈細胞對其的識別、處理及遞呈,從而誘導更強的體液免疫和細胞免疫應答的發(fā)生。 本研究將小鼠tPA分泌信號肽的cDNA與
4、PPE68蛋白的編碼基因Rv3873進行嵌合,構(gòu)建嵌合真核重組質(zhì)粒pcDNA-t-Rv3873,在體外轉(zhuǎn)染BALB/C3T3細胞并獲得穩(wěn)定表達的基礎上,免疫BALB/C小鼠后檢測免疫小鼠脾淋巴細胞體外誘導培養(yǎng)后的增殖活性,IFN-γ產(chǎn)生水平以及CD4+和CD8+T淋巴細胞的增殖與CD4+/CD8+T淋巴細胞比例的變化,并將其與pcDNA3.1/Myc-His(+)及pcDNARv3873免疫組的結(jié)果進行比較分析發(fā)現(xiàn),pcDNA-t-Rv
5、3873免疫小鼠的脾淋巴細胞體外誘導培養(yǎng)后的增殖活性、IFN-γ產(chǎn)生水平以及CD4+和CD8+T淋巴細胞的增殖及CD4+/CD8+T淋巴細胞的比例變化均明顯高于pcDNARv3873及pcDNA3.1/Myc-His(+)免疫組。該結(jié)果提示可能由于tPA分泌信號肽的存在使PPE68的分泌表達增加,從而誘導了更強的細胞免疫應答的發(fā)生。 本研究比較系統(tǒng)的對PPE68蛋白的免疫功能及tPA分泌信號肽序列對蛋白質(zhì)分泌表達的影響進行了分析
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