熒光共振能量轉(zhuǎn)移體系的建立及其在核酸和抗體檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、Kras基因是一種癌基因，在腫瘤中的突變率較高。它就像體內(nèi)的一個(gè)“開(kāi)關(guān)”，調(diào)控著腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和血管生成過(guò)程中的信號(hào)傳導(dǎo)，影響著腫瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散。Kras基因的檢測(cè)能夠?yàn)槟[瘤的臨床診斷，病情評(píng)估和預(yù)后判斷以及基因的靶向治療提供重要依據(jù)。因此，對(duì)組成Kras基因及其突變體的寡核苷酸分子進(jìn)行定量檢測(cè)，在癌癥的診療方面具有重要意義。
　　 白細(xì)胞介素-8(IL-8)是白細(xì)胞介素家族中的一員，是具有多效性和重疊性的生物活性因子。IL-8能

2、夠調(diào)控血細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育和分化成熟以及機(jī)體的免疫應(yīng)答，同時(shí)與多種癌癥有關(guān)。人源化的抗IL-8單克隆抗體已經(jīng)應(yīng)用于相關(guān)疾病的臨床研究中。設(shè)計(jì)出快速高效的檢測(cè)抗IL-8單克隆抗體的方法，將為各種炎癥的治療和腫瘤的研究提供有利條件。
　　 本文對(duì)三種新型熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)體系進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，并將這些體系應(yīng)用于核酸檢測(cè)和免疫分析，定量檢測(cè)了突變型Kras基因片段和生物素化的抗IL-8單克隆抗體。
　　 本文第一章為緒論

3、部分，該部分全面總結(jié)了FRET的原理，理論計(jì)算方法和熒光探針的研究進(jìn)展，重點(diǎn)介紹了FRET體系在生物分析中的應(yīng)用，對(duì)核酸檢測(cè)，免疫分析，蛋白質(zhì)相互作用等方面作了詳細(xì)的敘述。
　　 本文第二章對(duì)表面活性劑CPB作用下的FRET體系進(jìn)行了詳細(xì)的研究。該體系通過(guò)陽(yáng)離子表面活性劑對(duì)DNA的壓縮作用來(lái)增強(qiáng)FRET信號(hào)，在不必分離過(guò)剩探針的情況下實(shí)現(xiàn)了長(zhǎng)間距的供受體之間的FRET，并對(duì)含有30個(gè)堿基的靶DNA進(jìn)行了定量檢測(cè)。此外，利用圓二色

4、譜法初步探討了CPB與雙鏈DNA的作用機(jī)理，對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行了合理解釋。
　　 本文第三章對(duì)表面活性劑CTAB增敏的FRET體系進(jìn)行了詳細(xì)的研究。該體系通過(guò)陽(yáng)離子表面活性劑與量子點(diǎn)和染料標(biāo)記的二抗分子的相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)FRET，不必對(duì)抗體的特定區(qū)域進(jìn)行標(biāo)記或使用特殊的抗體片段?；贔RET導(dǎo)致的受體熒光峰面積的增加，對(duì)生物素化的IL-8的單克隆抗體實(shí)現(xiàn)了定量檢測(cè)。
　　 本文第四章對(duì)DNA嵌入型染料JOJO-1作為供體的FR

5、ET體系進(jìn)行了研究。研究發(fā)現(xiàn)，利用DNA嵌入染料JOJO-1作為供體構(gòu)建FRET體系，不必對(duì)捕獲DNA進(jìn)行標(biāo)記，而且可以有效降低空白中的假陽(yáng)性，提高方法的選擇性?；贔RET造成的受體熒光峰面積的增加，成功的對(duì)含有30個(gè)堿基的靶DNA進(jìn)行了定量分析。
　　 本論文的主要特點(diǎn)：
　　 一、研究表面活性劑對(duì)FRET體系的影響，并利用靜電相互作用，建立起兩種新的定量檢測(cè)長(zhǎng)鏈核酸和抗體分子的方法。
　　 二、研究DNA嵌