熒光素及中性紅染料間能量轉移機理研究及其分析應用.pdf

1、熒光共振能量轉移是一種通過熒光物質間發(fā)生熒光能量傳遞進行分析的實驗方法。能量轉移的應用與單個染料光度測定相比，具有比光度法靈敏度高，與常規(guī)熒光法和共振光散射相比受瑞利散射光干擾少，重現(xiàn)性好的特點，該方法已被廣泛應用于化學分析、生物結構研究等領域。本文就此類方法進行了初步的機理研究及其相關應用研究，共分以下五部分：
　　 第一章：對近年來熒光素類酸性染料及堿性染料中性紅在熒光分析中的應用和染料間非輻射熒光共振能量轉移的機理研究及在

2、分析化學中的應用進行了較全面的綜述，共引用參考文獻62篇。
　　 第二章：應用熒光光譜法研究了水溶液體系中，酸性染料四溴熒光素（TBF）、四碘熒光素（TIF）、四氯四碘熒光素（TCTIF）、四氯四溴熒光素（TCTBF）分別與堿性染料中性紅（NR）之間的相互作用。實驗表明：NR對各酸性染料的熒光都有較強的猝滅作用，由熒光猝滅結果求得不同溫度下NR與各種酸性染料的結合常數(shù)K。發(fā)現(xiàn)K值隨反應溫度上升而下降且隨酸性染料取代基的電負性增加

3、而增大，進一步證實了該反應為單一靜態(tài)猝滅過程。由反應焓變、熵變，確定NR與酸性染料間的結合力主要是靜電引力。依據(jù)非輻射能量轉移機理，得到了不同溫度下各酸性染料與NR相互結合時，能量轉移效率、能量給體與能量受體間距離r等參數(shù)，各體系r<7 nm表明該熒光猝滅是通過非輻射能量轉移過程產生的。并發(fā)現(xiàn)隨著染料取代基的電負性增加，能量轉移參數(shù)的一些變化規(guī)律。
　　 第三章：四溴熒光素-中性紅熒光能量轉移抑制法測定肝素。在pH6.65的Br

4、itton-Robinson（B-R）緩沖溶液中，酸性染料四溴熒光素（TBF）與堿性染料中性紅（NR）之間由于靜電吸引而能夠發(fā)生有效的能量轉移，使得能量受體NR熒光增強，同時能量給體TBF的熒光猝滅。而肝素的加入對該熒光體系間的能量轉移產生了明顯的抑制作用，隨肝素量的增加TBF熒光依次增強，即能量轉移過程受到抑制而發(fā)生逆轉，由此建立了一種測定微量肝素的新方法。結果表明，肝素在0.1～2.0 mg/L范圍內與TBF的熒光增強程度呈良好的線

5、性關系，方法檢出限0.071 mg/L。該方法用于肝素鈉注射液中肝素鈉效價的測定，六次平行測定相對標準偏差1.39％～3.59％，回收率95.2％～105.3％，結果滿意。
　　 第四章：四溴熒光素-中性紅逆向能量轉移熒光法測定蛋白質。在pH2.35的B-R緩沖溶液中，酸性染料四溴熒光素（TBF）與堿性染料中性紅（NR）之間由于靜電吸引能夠發(fā)生有效的能量轉移，使能量受體NR熒光增強，能量給體TBF的熒光猝滅。在該體系中加入人血清

6、白蛋白（HSA），由于競爭作用使得HSA的加入破壞了TBF-NR間的能量轉移，產生了明顯的逆向反應，并且生成HSA-TBF絡合物，利用該絡合物的熒光增加強度與HSA含量間的線性關系建立了一種測定微量血清蛋白的新方法。結果表明，血清蛋白的測定范圍0.6～12.0 mg/L；方法檢出限0.25 mg/L；六次平行測定相對標準偏差1.94％～4.58％；回收率96.3％～104.9％。方法的穩(wěn)定性好，選擇性高，直接用于人血清試樣中總蛋白含量的

7、測定，與常用的雙縮脲法基本一致。
　　 第五章：膠束體系中熒光素與四溴熒光素間能量轉移條件及模型研究。研究了陽離子表面活性劑（CSAA）溴代十六烷基三甲銨（CTMAB）及溴代十六烷基吡啶（CPB）在水溶液中與陰離子酸性染料四溴熒光素（TBF）的熒光反應，發(fā)現(xiàn)當CSAA單體與TBF形成離子締合物時，TBF的熒光發(fā)生猝滅，而隨著CSAA膠束與TBF繼續(xù)作用又會產生一個新的、更強的熒光。進而研究了陽離子表面活性劑CTMAB及CPB膠束