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1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD)是一種不可逆的神經(jīng)退行性腦部疾病,具有記憶能力丟失和認(rèn)知功能障礙等特點(diǎn)。AD發(fā)病機(jī)理復(fù)雜,但與氧化應(yīng)激存在密切的聯(lián)系。研究表明從天然產(chǎn)物中分離得到的植物化學(xué)物具有改善腦部氧化應(yīng)激的作用,從而緩解阿爾茨海默病。本課題采用系統(tǒng)的分離提取技術(shù),得到五種極性不同的組分,通過建立體外H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤)氧化損傷模型,篩選出具有抑制氧化損傷的正丁醇萃取物(PK
2、BE);PKBE用AB-8大孔樹脂進(jìn)一步分離,篩選出對(duì)氧化損傷抑制效果更佳的PKBE50%乙醇洗脫組分(PKBE-50);研究了PKBE-50對(duì)PC12細(xì)胞氧化損傷抑制途徑,通過阿爾茨海默病動(dòng)物模型,驗(yàn)證了PKBE-50的生理功能。主要研究?jī)?nèi)容包括:
采用95%乙醇冷浸提取紅松球果,殘?jiān)盟魵饣亓魈崛。瑵饪s后的乙醇浸膏用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行逐級(jí)萃取,對(duì)萃取物進(jìn)行成分分析。結(jié)果表明正丁醇萃取物(PKBE)中多酚和
3、黃酮含量較高,而水提物(PKWE)中多糖含量最高。
通過H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷模型,發(fā)現(xiàn)PKBE對(duì)氧化損傷抑制作用最強(qiáng)。利用AB-8大孔樹脂對(duì)PKBE進(jìn)行分離,用不同梯度乙醇洗脫,對(duì)洗脫物進(jìn)行活性跟蹤。結(jié)果表明PKBE-50能明顯提高H2O2損傷后細(xì)胞的存活率、降低乳酸脫氫酶(LDH)滲漏,抑制脂質(zhì)過氧化物的生成,提高H2O2損傷后細(xì)胞內(nèi)SOD的活性;PKBE-50還能通過清除細(xì)胞內(nèi)的活性氧,抑制PC12細(xì)胞氧化損
4、傷后線粒體膜電位的下降,達(dá)到抑制PC12細(xì)胞氧化損傷的作用。
采用高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)PKBE-50的組成進(jìn)行分析,結(jié)果表明PKBE-50含有咖啡酸、穗花杉雙黃酮、二氫楊梅素乙酰葡萄糖苷、錦葵花素3-O-葡萄糖苷等黃酮多酚類物質(zhì)等組成。
通過腹腔連續(xù)注射D-半乳糖和亞硝酸鈉建立氧化應(yīng)激AD模型,研究了PKBE-50對(duì)小鼠學(xué)習(xí)和記憶以及小鼠腦組織中抗氧化酶系的影響。發(fā)現(xiàn)AD模型小鼠灌胃給予PKBE-50,能夠明顯改
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