子宮內(nèi)膜異位癥間質(zhì)細(xì)胞離體培養(yǎng)及GnRHⅠ、GnRHⅡ?qū)ζ湓鲋骋种谱饔玫难芯?pdf

1、目的：通過對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMs）患者在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行體外分離培養(yǎng)，并予鑒定；再以不同濃度的GnRHⅡ作用于離體培養(yǎng)的間質(zhì)細(xì)胞，并以GnRHⅠ作對(duì)照，探討GnRHⅡ、GnRHⅠ對(duì)離體培養(yǎng)間質(zhì)細(xì)胞的直接作用，并進(jìn)行分析比較。 方法：采用胰蛋白酶、膠原酶消化結(jié)合篩網(wǎng)過濾及離心分離法進(jìn)行子宮內(nèi)膜異位癥在位、異位間質(zhì)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定；然后在培養(yǎng)液中加入10-10M、10-8M、10-6M

2、的GnRHⅡ，繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h、72h，并以GnRHⅠ類似物（戈舍瑞林，Goserelin）作對(duì)比，同時(shí)設(shè)對(duì)照組（不加GnRH），采用四唑鹽比色（MTT）試驗(yàn)法測(cè)定間質(zhì)細(xì)胞的存活情況，計(jì)算抑制率并進(jìn)行比較。 結(jié)果：1.采用胰蛋白酶、膠原酶、篩網(wǎng)過濾及離心法，在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)成活率為83.33％，異位間質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)成活率為66.67％。 2.用10-10M、10-8M、10-6M的GnRHⅡ?qū)Ms患者

3、離體培養(yǎng)的在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，培養(yǎng)24h后的抑制率（％）分別為（15.32±2.43、26.41±2.75、38.06±4.15），培養(yǎng)48h后的抑制率（％）分別為（30.41±3.50、41.78±4.49、53.34±5.83），培養(yǎng)72h后的抑制率（％）分別為（50.01±3.70、63.29±4.47、81.58±3.44）。對(duì)異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)24h后的抑制率（％）分別為（38.42±2.67，51.35±3.

4、70，62.84±4.13），培養(yǎng)48h后的抑制率（％）分別為（53.41±3.79，64.47±4.78，76.39±5.71），培養(yǎng)72h后的抑制率（％）分別為（70.29±2.87，83.25±3.73，93.39±4.85）。發(fā)現(xiàn)：依次升高濃度的GnRHⅡ在相同時(shí)間對(duì)相同間質(zhì)細(xì)胞增殖的抑制率逐漸升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），相同濃度的GnRHⅡ在相對(duì)長(zhǎng)時(shí)間對(duì)相同間質(zhì)細(xì)胞增殖的抑制率逐漸升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0

5、5），提示：GnRHⅡ?qū)﹄x體培養(yǎng)間質(zhì)細(xì)胞抑制率呈劑量時(shí)間依賴性，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且對(duì)異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖的抑制率高于在位，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 3.以10-10M、10-8M、10-6M的GnRHⅠ類似物（戈舍瑞林）對(duì)EMs患者離體培養(yǎng)的在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞干預(yù)，培養(yǎng)24h后的抑制率（％）分別為（5.42±0.93，11.19±1.29，23.97±3.00），培養(yǎng)48h后的抑制率（％）分別為

6、（18.00±2.02，28.98±3.91，41.98±4.86），培養(yǎng)72h后的抑制率（％）分別為（32.20±2.91，46.94±4.08，60.73±4.70）；對(duì)異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，培養(yǎng)24h后的抑制率（％）分別為（25.63±1.24，37.53±2.35，48.70±3.15），培養(yǎng)48h后的抑制率（％）分別為（38.54±2.77，50.70±3.46，60.65±4.25），培養(yǎng)72h后的抑制率（％）分別為

7、（58.38±1.36，69.75±2.18，78.69±3.75）。發(fā)現(xiàn)：依次升高濃度的GnRHⅠ類似物在相同時(shí)間對(duì)相同間質(zhì)細(xì)胞增殖的抑制率逐漸升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），相同濃度的GnRHⅠ類似物在相對(duì)長(zhǎng)時(shí)間對(duì)相同間質(zhì)細(xì)胞增殖的抑制率逐漸升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示：GnRHⅠ對(duì)離體培養(yǎng)間質(zhì)細(xì)胞抑制率呈劑量時(shí)間依賴性，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且對(duì)異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖的抑制率高于在位（P<0.

8、05）。 4.GnRHⅡ?qū)Ms患者離體培養(yǎng)的在位與異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞增殖的抑制率明顯高于GnRHⅠ類似物（戈舍瑞林）（P<0.05）。 結(jié)論: 1.采用胰蛋白酶、膠原酶消化結(jié)合篩網(wǎng)過濾及離心分離法，成功建立了子宮內(nèi)膜異位癥間質(zhì)細(xì)胞的體外模型，為研究EMs的發(fā)病機(jī)制和藥物治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2.卵巢EMs間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)成功率與所取部位有關(guān)。 3.GnRHⅡ?qū)Ms患者離體培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的