電脈沖介導(dǎo)表達(dá)EGFRvⅢDNA免疫預(yù)防小鼠顱內(nèi)腫瘤研究.pdf

1、編碼腫瘤特異性抗原蛋白的DNA疫苗不僅能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性抗腫瘤的CD8+ T細(xì)胞的免疫應(yīng)答,而且還能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫,從而顯示出抗腫瘤免疫的優(yōu)勢。對于顱內(nèi)腫瘤來說編碼腫瘤特異性抗原蛋白的DNA免疫不僅可以減少自身免疫的風(fēng)險,還能精確地消除表達(dá)特異性抗原的腫瘤細(xì)胞。然而,裸DNA的免疫誘導(dǎo)能力極差,需要借助其他的載體或物理輸送方法來提高其免疫效果。電脈沖是目前最為有效的質(zhì)粒DNA物理輸送方法,而且還能提高DNA疫苗的免疫應(yīng)答效果。<

2、br>　　腫瘤特異性抗原蛋白,表皮生長因子受體突變體Ⅲ(EGFRvⅢ)是腦膠質(zhì)瘤最常見的突變體抗原之一。本文中以EGFRvIII為抗原蛋白構(gòu)建DNA疫苗,并利用電脈沖介導(dǎo)DNA疫苗免疫小鼠,驗證該DNA疫苗的免疫誘導(dǎo)能力及抑制EGFRvIII陽性腫瘤細(xì)胞在顱內(nèi)成瘤和生長的效果。我們首先克隆并構(gòu)建了EGFRvIII的表達(dá)質(zhì)粒;經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染B16F10細(xì)胞后篩選穩(wěn)定表達(dá)該蛋白的細(xì)胞株(B16F10-EGFRvIII),并用蛋白印跡及細(xì)胞免疫

3、化學(xué)方法進(jìn)行驗證;將DNA疫苗用電脈沖方法免疫小鼠并用CTL檢測DNA疫苗的免疫效果;免疫小鼠皮下和顱內(nèi)接種腫瘤細(xì)胞,驗證電脈沖DNA免疫對腫瘤形成和生長的抑制效果。
　　研究結(jié)果表明我們構(gòu)建的重組質(zhì)粒能高效表達(dá)EGFRvIII;篩選所得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,EGFRvIII能正確的表達(dá)和定位;與未免疫組相比,電脈沖介導(dǎo)DNA疫苗免疫能誘導(dǎo)更顯著的細(xì)胞免疫應(yīng)答(p<0.05),并顯示對皮下和顱內(nèi)腫瘤的形成和生長有明顯的抑制效果(s.c.,