腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞表型在癲癇發(fā)生過程中的作用研究.pdf

1、第一部分、癲癇發(fā)生過程中腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞表型的動態(tài)變化
　　目的：探索小鼠在癲癇發(fā)生過程中的不同時期腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞表型以及表型相關(guān)細胞因子的動態(tài)變化。
　　方法：選用7-8周齡C57BL/6J小鼠，分為正常對照組和實驗組。實驗組采用匹魯卡品腹腔注射誘導驚厥持續(xù)狀態(tài)（Status epilepticus,SE），同時進行腦電監(jiān)測對模型進行驗證。采用FCM對 SE后不同時期小膠質(zhì)細胞表型的變化進行動態(tài)監(jiān)測；酶聯(lián)免疫標記分析(Enz

2、yme-linked immunosorbent assay, ELISA)監(jiān)測SE后不同表型小膠質(zhì)細胞所分泌的相關(guān)細胞因子白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白介素-4(Interleukin-4,IL-4)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)的變化情況。
　　結(jié)果：
　　(1)匹魯卡品能夠誘發(fā)C57BL/6J小鼠出現(xiàn)驚厥表現(xiàn)，并且SE后腦電圖改變符合癲癇發(fā)生過程中的各時期腦電圖

3、變化。
　　(2)小鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞表型比例在SE后癲癇發(fā)生的過程中動態(tài)變化，M1型小膠質(zhì)細胞比例在 SE后迅速升高，并維持在較高水平，直至SE后20天左右開始逐漸下降，隨后降至接近對照水平；M2型小膠質(zhì)細胞比例在SE后迅速下降，隨后逐漸升高，在SE后第20天左右達到高峰，并于SE后第28天將至接近對照水平。
　　(3)腦內(nèi)M1型小膠質(zhì)細胞分泌的典型細胞因子IL-1β的水平的波動趨勢與M1型小膠質(zhì)細胞比例的變化趨勢基本一致；

4、M2型小膠質(zhì)細胞分泌的典型細胞因子IL-4、IL-10的水平與M2型小膠質(zhì)細胞比例的變化趨勢基本一致。
　　結(jié)論：SE后癲癇發(fā)生過程中小膠質(zhì)細胞的不同表型所占比例動態(tài)變化，表型相關(guān)細胞因子的水平與表型變化趨勢基本一致，說明小膠質(zhì)細胞的表型變化參與了癲癇發(fā)生過程。
　　第二部分、腹腔注射IFN-γ/IL-4調(diào)節(jié)腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞表型及相應細胞因子
　　目的：探索能否通過腹腔注射Th1細胞因子（IFN-γ）或Th2細胞因子（I

5、L-4）調(diào)控腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞的表型方法：根據(jù)第一部分結(jié)果，在M1比例顯著升高的早期分別給予IFN-γ和IL-4以達到進一步促進M1比例升高和抑制M1比例升高的作用，在M2比例顯著升高的中期分別給予IFN-γ和IL-4以抑制M2的產(chǎn)生和進一步促進M2比例升高。選用7-8周齡C57BL/6J小鼠，采用匹魯卡品腹腔注射誘導驚厥持續(xù)狀態(tài)，隨機分成6組：早期生理鹽水干預組、早期IFN-γ干預組、早期IL-4干預組、中期生理鹽水干預組、中期IFN-γ

6、干預組、中期IL-4干預組。應用FCM檢測干預后小膠質(zhì)細胞的表型變化，進一步應用ELISA檢測細胞因子IL-1β、IL-4、IL-10的水平，了解干預后不同小膠質(zhì)細胞表型是否發(fā)生了變化，及表型相關(guān)細胞因子水平的變化是否與表型一致。
　　結(jié)果：
　?。?）腹腔注射細胞因子能夠達到增加外周血及腦組織細胞因子濃度的作用。
　?。?）早期補充IFN-γ不能進一步增加SE后M1的比例。中期補充IL-4也無法進一步增加M2的比例。

7、SE后表型相關(guān)細胞因子在SE后第15天達到峰值，而早期IFN-γ組、中期IL-4組腦內(nèi)IL-1β、IL-4、IL-10的峰值水平與生理鹽水干預組無顯著性差異。
　　（3）早期給予IL-4可以顯著抑制SE后早期M1的持續(xù)升高。同樣的，中期給予IFN-γ抑制了M2的升高。在SE后第15天，早期IL-4組及中期IFN-γ組腦內(nèi)IL-1β、IL-4、IL-10的峰值水平較生理鹽水干預組明顯降低。
　?。?）抑制表型發(fā)生偏移并不是通過

8、抑制小膠質(zhì)細胞活化實現(xiàn)的。
　　結(jié)論：進一步增加SE后小膠質(zhì)細胞表型偏移程度的干預措施不能到達預期效果，而抑制SE后小膠質(zhì)細胞表型偏移的干預措施均成功抑制了表型的偏移。
　　第三部分、抑制SE后小膠質(zhì)細胞表型偏移對癲癇發(fā)生及認知功能損傷的作用
　　目的：探索在SE后通過抑制小膠質(zhì)細胞的表型的偏移能否影響癲癇的發(fā)生及腦認知功能損傷。
　　方法：在SE后第50天對實驗組（生理鹽水干預組、早期IL-4干預組、中期IFN

9、-γ干預組）及對照組（正常對照組、IFN-γ對照組、IL-4對照組）的小鼠植入顱內(nèi)電極，利用腦電連續(xù)檢測14天，觀察自發(fā)性癲癇發(fā)作（Spontaneous recurrent seizures,SRS）情況。應用Morris水迷宮檢測干預后小鼠的空間學習記憶能力來反應認知功能的變化。
　　結(jié)果：在腦電檢測過程中，對照組（正常對照組、IFN-γ對照組、IL-4對照組）未出現(xiàn)驚厥發(fā)作。早期IL-4干預組、中期IFN-γ干預組的SRS發(fā)