小鼠腹腔B1細胞一氧化氮(NO)依賴性殺菌機制研究.pdf

1、關于B1細胞的特性和功能等的研究一直是近10年來免疫學領域的重要課題。B細胞是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，目前研究認為B細胞至少分為B1和B2兩個細胞亞群，其中位于腹腔的B1細胞具有天然免疫細胞的特性，表達吞噬相關表面標記Mac-1、F4/80等分子，在抗感染等天然免疫應答中具有重要的作用。本實驗組前期實驗工作中發(fā)現(xiàn)小鼠腹腔B1細胞可以吞噬金黃葡萄球菌，并具有清除細菌和真菌感染的作用。專職吞噬細胞的殺菌機制有兩方面，其中一方面通過溶酶體

2、內(nèi)的酶來殺滅病原體，另一方面是氧化殺菌機制，就是通過呼吸爆發(fā)產(chǎn)生NO等氧自由基，來殺滅病原體。關于小鼠腹腔B1細胞吞噬殺菌過程中是否存在氧化殺菌機制尚不清楚，為進一步闡釋NO在B1細胞殺菌過程中的作用，本實驗對其機制進行了初步研究。
　　目的：本實驗旨在通過體外實驗取小鼠腹腔B1細胞與金黃葡萄球菌（SA）共培養(yǎng)，檢測一氧化氮（NO）合成量，誘導型一氧化氮合酶（iNOS）及相關細胞因子mRNA的表達。觀察經(jīng)氨基胍（AG）體外抑制iN

3、OS功能后細胞內(nèi)SA的存活率，探討小鼠腹腔B1細胞殺菌機制中NO的作用。
　　方法：（1）取C57BL/6小鼠的腹腔灌洗液細胞及脾臟細胞，以PE/Cy5-ratantimouseCD19及親和素標記的磁珠進行免疫磁珠分選，最終得到腹腔CD19+細胞（B1細胞）和腹腔CD19-細胞（巨噬細胞）。將磁珠分選得到的細胞分別行流式細胞儀上機檢測磁珠分選效率及與SA共培養(yǎng)，檢測NO合成量的變化；（2）將上述磁珠分選得到的B1細胞與SA共培養(yǎng)

4、，提取總RNA行RealTime-PCR比較各組iNOS及相關細胞因子的表達量；（3）將上述磁珠分選得到的B1細胞與SA共培養(yǎng)，行AG體外抑制iNOS的功能，觀察細胞內(nèi)SA的存活率。
　　結(jié)果：（1）流式結(jié)果發(fā)現(xiàn)磁珠分選B1細胞效率較高，B1細胞與金葡菌共培養(yǎng)后，用硝酸還原酶法檢測，發(fā)現(xiàn)NO的產(chǎn)生量與對照組相比明顯增加，NO合成量與共培養(yǎng)時間成正比例；（2）RealTime-PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)SA誘導刺激后不同時間點B1細胞iN

5、OSmRNA的表達量明顯升高，IL-4、IL-10的表達量與對照組相比明顯降低，TNF-α、IFN-γ的表達量與對照組相比明顯升高；（3）本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)AG體外抑制iNOS功能后，細胞內(nèi)SA菌的存活率明顯高于未加氨基胍組。
　　結(jié)論：小鼠腹腔B1細胞體外經(jīng)金黃葡萄球菌誘導刺激后其NO合成量及iNOS表達量明顯升高，同時IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ等細胞因子的mRNA表達水平發(fā)生明顯改變。經(jīng)氨基胍體外抑制iNOS功