2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  胚胎著床是妊娠的關(guān)鍵環(huán)節(jié),是具備著床能力的胚胎與容受態(tài)子宮建立緊密聯(lián)系的過程。圍著床期小鼠子宮主要依賴以下步驟完成胚胎著床過程:小鼠子宮在孕D4天處于容受態(tài),子宮內(nèi)膜處于允許囊胚粘附的狀態(tài);在小鼠孕D5天,囊胚粘附并侵入子宮內(nèi)膜,子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞隨即廣泛地增殖和分化,發(fā)生蛻膜化樣改變,孕D6天形成初級蛻膜區(qū)。胚胎的正常著床對于后續(xù)妊娠維持、分娩均起著重要的作用。然而,目前關(guān)于胚胎著床機(jī)制的研究還不夠全面。自噬是存在于真

2、核細(xì)胞的普遍現(xiàn)象,依賴溶酶體對物質(zhì)進(jìn)行降解,來維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)以及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的更新。近年研究證實自噬參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展;胚胎侵入子宮與腫瘤發(fā)生過程存在相似性,但是自噬是否參與胚胎著床過程并未見報道。課題組前期基因芯片研究發(fā)現(xiàn)孕D5天小鼠著床點子宮內(nèi)膜中自噬相關(guān)標(biāo)志分子的表達(dá)低于著床旁子宮內(nèi)膜。因此,我們推測自噬可能參與了圍著床期子宮內(nèi)膜正常功能的維持,進(jìn)而調(diào)節(jié)胚胎著床。
  方法:
  1.自噬相關(guān)標(biāo)志分子在圍著床期小鼠子宮內(nèi)

3、膜中的表達(dá)
  1)建立小鼠正常妊娠模型,收集孕D4、D5、D6天小鼠子宮內(nèi)膜,采用 Western Blot檢測小鼠圍著床期子宮內(nèi)膜中自噬相關(guān)標(biāo)志分子LC3、ATG5的表達(dá)。
  2)建立小鼠正常妊娠模型,收集孕D5天著床點與著床旁子宮內(nèi)膜組織。采用透射電鏡尋找自噬小體,分別用Real-time PCR和Western Blot檢測自噬相關(guān)標(biāo)志物CathepsinB、P62等分子在著床點和著床旁子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)。

4、>  3)建立自噬抑制劑3-MA干預(yù)的小鼠妊娠模型,收集孕D5天小鼠子宮著床點與著床旁子宮內(nèi)膜組織;驗證模型建立成功后,尾靜脈注射臺盼藍(lán)后觀察小鼠胚胎著床情況,HE染色觀察自噬被抑制后小鼠子宮組織形態(tài)的改變。并采用Western Blot檢測自噬抑制后蛻膜化標(biāo)志因子HOXA10、PR的表達(dá)。
  2.自噬在子宮蛻膜化中的作用
  1)建立假孕小鼠人工誘導(dǎo)蛻膜化模型,收集誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)和對照側(cè)子宮內(nèi)膜組織;分別使用Real-ti

5、me PCR和Western Blot檢測自噬相關(guān)標(biāo)志物 CathepsinB、ATG5、P62等分子在誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)以及對照側(cè)子宮內(nèi)膜中的表達(dá)。體外分離并培養(yǎng)小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞蛻膜化后,Western Blot檢測自噬相關(guān)標(biāo)志物L(fēng)C3、ATG5、P62的表達(dá)。
  2)建立自噬抑制劑3-MA干預(yù)的假孕小鼠人工誘導(dǎo)蛻膜化模型,驗證模型建立成功后,使用Western Blot檢測自噬抑制后蛻膜化標(biāo)志因子HOXA10、PR的表達(dá)

6、,HE染色觀察自噬被抑制后的子宮組織形態(tài)。體外分離并培養(yǎng)小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞,自噬抑制劑3-MA處理細(xì)胞后誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化,檢測蛻膜化標(biāo)志因子HOXA10、PR的表達(dá)。
  結(jié)果:
  1.自噬相關(guān)標(biāo)志分子在圍著床期小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)
  1)自噬相關(guān)標(biāo)志物L(fēng)C3-II、ATG5在小鼠孕D5、D6天子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)水平較孕D4天顯著降低。
  2)自噬小體的數(shù)目在孕D5天著床點低于著床旁,自噬相關(guān)標(biāo)志分子Ca

7、thepsinB、P62 mRNA水平及蛋白水平在小鼠孕D5天著床點顯著低于著床旁。
  3)自噬抑制劑3-MA干預(yù)后,肉眼觀察可見孕鼠胚胎著床點數(shù)量無顯著差異,但分布不均。HE檢測發(fā)現(xiàn)小鼠孕D5天子宮腔上皮出現(xiàn)異常折疊且植入室閉合不完全。此外,子宮蛻膜化標(biāo)志因子HOXA10、ER-α、PR蛋白的表達(dá)均顯著降低。
  2.自噬在子宮內(nèi)膜蛻膜化中的作用
  1)與對照側(cè)相比,人工誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)的小鼠子宮內(nèi)膜組織中自噬相關(guān)標(biāo)

8、志分子P62、ATG5、CathepsinB、ULK1以及BECN1 mRNA表達(dá)顯著降低;自噬相關(guān)分子LC3-II、ATG5以及 P62蛋白在誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)顯著下調(diào)。原代分離培養(yǎng)小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞,體外誘導(dǎo)蛻膜化后,自噬相關(guān)標(biāo)志物L(fēng)C3-II、ATG5、P62蛋白表達(dá)水平較未誘導(dǎo)的基質(zhì)細(xì)胞顯著降低。
  2)肉眼觀察發(fā)現(xiàn),與對照組相比,自噬抑制劑3-MA干預(yù)組中誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)子宮外觀異常,且子宮濕重顯著降低;H

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