轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶對(duì)Hela細(xì)胞株CCR5基因靶點(diǎn)編輯作用研究.pdf

1、目的：含轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶（Transcription activator-like effectors nucleases，TALENs）左臂TALEN F16.5與右臂TALEN R18.5的重組穿梭質(zhì)粒pDC316聯(lián)合作用對(duì)趨化因子受體5（chemokine receptor type5，CCR5）進(jìn)行基因編輯，通過堿基變化使CCR5結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而證實(shí)TALENs具有基因定向編輯的作用。
　　方法:構(gòu)建表達(dá)TAL

2、ENs的重組載體。將Jurkat和Hela細(xì)胞分為四組：第一組：重組TALEN F16.5穿梭質(zhì)粒/重組TALEN R18.5穿梭質(zhì)粒/CVU55762（FRC組）組；第二組：重組TALEN F16.5穿梭質(zhì)粒/CVU55762組（FC組）;第三組：blank（CVU55762）組；第四組：熒光蛋白對(duì)照組GFP組。對(duì)Hela細(xì)胞株轉(zhuǎn)染對(duì)CCR5基因具有表達(dá)編輯功能的TALENs的含TALEN F16.5與TALEN R18.5重組質(zhì)粒和

3、有熒光蛋白的質(zhì)粒CVU55762，首先通過觀察熒光情況初步確定轉(zhuǎn)染效率以及基因編輯效率，然后采用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染情況并對(duì)Hela細(xì)胞基因組CCR5片段測(cè)序。
　　結(jié)果:熒光效率顯示表達(dá)轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶TALEN F16.5與TALEN R18.5的重組穿梭質(zhì)粒pDC316同時(shí)作用CCR5能顯著破壞其堿基序列；第一組轉(zhuǎn)染細(xì)胞熒光效率較高；第一組細(xì)胞株較其他三組細(xì)胞株的CCR5序列出現(xiàn)堿基異常（增加或減少堿基）水平相對(duì)較高