多沙唑嗪對(duì)硫酸吲哚酚誘導(dǎo)的單核細(xì)胞趨化蛋白-1表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:
　　 慢性腎臟疾病(CKD)患者同時(shí)也是動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病(CVD)的高危人群。大量研究證實(shí):慢性腎臟疾病患者體內(nèi)蓄積的腎毒性物質(zhì)可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng),促進(jìn)動(dòng)脈血管產(chǎn)生粥樣硬化病變。本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)為對(duì)象,探討a1腎上腺素受體阻滯劑--多沙唑嗪(DOX)是否影響腎毒性物質(zhì)--硫酸吲哚酚(IS)誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞中單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的表達(dá)并初步探討其作用機(jī)制。
　　 方法:

2、
　　 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,將其分成空白對(duì)照組、硫酸吲哚酚組、硫酸吲哚酚與多沙唑嗪聯(lián)合組(簡(jiǎn)稱(chēng)聯(lián)合組)和多沙唑嗪組。采用DHE染色法觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基(ROS)產(chǎn)物的變化；應(yīng)用Western-Blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的磷酸化ERK1/2、磷酸化p38MAPK和NF-rκBp65蛋白表達(dá)；采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)細(xì)胞的培養(yǎng)上清中MCP-1蛋白分泌情況；應(yīng)用RT-PCR分別測(cè)定MCP-1的mRNA和a1腎上

3、腺素受體D、B、A的mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)硫酸吲哚酚組活性氧自由基產(chǎn)物比對(duì)照組明顯增加,聯(lián)合組和多沙唑嗪組的活性氧自由基產(chǎn)物比硫酸吲哚酚組明顯減少。硫酸吲哚酚呈時(shí)間依賴(lài)性誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中活性氧自由基產(chǎn)物增加,而多沙唑嗪顯著抑制硫酸吲哚酚誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基的產(chǎn)生。
　　 (2)硫酸吲哚酚呈時(shí)間依賴(lài)性誘導(dǎo)HUVEC中ERK1/2MAPK的磷酸化。聯(lián)合組細(xì)胞在硫酸吲哚酚誘導(dǎo)

4、2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘后測(cè)得的磷酸化ERK1/2MAPK的量與硫酸吲哚酚組比較分別減少10.53％、59.44％、42.13％、31.49％、25.67％、19.75％、18.08％(P<0.05)；其中以5分鐘時(shí)變化最顯著。硫酸吲哚酚組與對(duì)照組、硫酸吲哚酚組與聯(lián)合組、硫酸吲哚酚組與多沙唑嗪組相比,ERK1/2MAPK蛋白定量差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (3)聯(lián)合組和多

5、沙唑嗪組磷酸化p38MAPK的表達(dá)與硫酸吲哚酚組比較無(wú)明顯改變。
　　 (4)硫酸吲哚酚組的NF-κBp65較對(duì)照組增加94.84％(P<0.05),而聯(lián)合組的NF-κBp65比硫酸吲哚酚組減少20.68％(P<0.05)。硫酸吲哚酚組與對(duì)照組、硫酸吲哚酚組與聯(lián)合組、硫酸吲哚酚組與多沙唑嗪組比較,NF-κBp65蛋白定量差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (5)硫酸吲哚酚組MCP-1的mRNA表達(dá)與對(duì)照組相比呈時(shí)

6、間依賴(lài)性顯著增加,在硫酸吲哚酚誘導(dǎo)1小時(shí)后硫酸吲哚酚組MCP-1的mRNA表達(dá)比對(duì)照組增加56.17％(P<0.05),而與硫酸吲哚酚組相比,聯(lián)合組MCP-1的mRNA表達(dá)減少30.37％(P<0.05)。硫酸吲哚酚組與對(duì)照組、硫酸吲哚酚組與聯(lián)合組、硫酸吲哚酚組與多沙唑嗪組間差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (6)與硫酸吲哚酚組相比較,聯(lián)合組的MCP-1蛋白濃度在1小時(shí)、3小時(shí)、6小時(shí)、16小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)分別

7、下降21.07％、41.11％、49.62％、56.02％、38.44％、17.29％,其中以16小時(shí)時(shí)下降最顯著,兩組間的差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (7)在mRNA水平證實(shí)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)存在a1腎上腺素受體D和A,未發(fā)現(xiàn)a1腎上腺素受體B。
　　 結(jié)論:
　　 (1)多沙唑嗪抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶來(lái)源的ROS產(chǎn)物生成,進(jìn)而通過(guò)抑制ERK1/2MAPK及NF-κBp65途徑的