2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:肺癌是世界上發(fā)病率、死亡率最高的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重危害人類生命和健康。近年來盡管肺癌的臨床診斷技術(shù)與治療技術(shù)不斷改進(jìn)與提高,但依然因缺乏有效的肺癌早期診斷方法,臨床上僅有20-25%的非小細(xì)胞肺癌可獲得早期診斷,導(dǎo)致肺癌死亡率一直持續(xù)穩(wěn)定在85%的高水平。眾多流行病學(xué)研究資料表明吸煙是誘發(fā)肺癌的首要危險(xiǎn)因素,香煙煙霧中含有多種與肺癌關(guān)系密切的化學(xué)致癌物質(zhì)或誘變劑。這些物質(zhì)可通過氧化應(yīng)激、DNA損傷等不同機(jī)制,引起支氣管上皮細(xì)胞損害

2、、癌基因激活、抑癌基因突變和失活等導(dǎo)致細(xì)胞遺傳信息轉(zhuǎn)化而發(fā)生癌變。近年來隨著miRNA的不斷深入研究,人們發(fā)現(xiàn)miRNA不僅廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡、上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)型、組織器官形成和生長(zhǎng)發(fā)育等正常生理過程,也廣泛參與各種疾病的發(fā)生、發(fā)展過程,特別與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等病理過程關(guān)系密切。眾多有關(guān)肺癌的miRNA研究結(jié)果提示,miRNA不僅可做為肺癌早期診斷的分子生物標(biāo)記物,同時(shí)也可做為肺癌治療的分子靶標(biāo)而用于肺癌的治療,以及肺

3、癌治療效果的預(yù)后評(píng)估。近五年來有關(guān)香煙暴露與miRNA的研究表明,香煙煙霧可誘發(fā)人和鼠肺、肝等組織的miRNA表達(dá)變化。因此通過香煙暴露誘發(fā)miRNA表達(dá)變化與肺癌之間關(guān)系的研究,將有助于深入了解香煙暴露致肺癌發(fā)生的分子作用機(jī)制。但限于健康吸煙人肺組織標(biāo)本的獲取困難,臨床上難以通過獲取正常吸煙人肺組織進(jìn)行連續(xù)的觀察。而近年來隨著循環(huán)miRNA的研究發(fā)現(xiàn),循環(huán)miRNA具有良好的微侵襲性、高度組織特異性、穩(wěn)定性等特點(diǎn),可能是腫瘤早期診斷的

4、理想分子生物標(biāo)記物和腫瘤治療的靶標(biāo)。鑒于循環(huán)miRNA的這些優(yōu)點(diǎn),我們將通過研究血清miRNA在正常人群、吸煙人群和肺癌人群間的表達(dá)變化,闡明香煙暴露條件下血清miRNA表達(dá)水平變化與肺癌血清miRNA之間關(guān)系;其次分析比較血清特異性的miRNA表達(dá)變化與肺癌病理類型、吸煙指數(shù)之間的劑量效應(yīng)關(guān)系;最后通過吸煙誘導(dǎo)特異性改變的miRNA作用的靶基因和信號(hào)通路預(yù)測(cè),了解吸煙誘導(dǎo)肺癌變過程中血清miRNA可能參與的作用機(jī)制。
  方法:

5、①吸煙與肺癌患者血清microRNA差異性表達(dá)研究。胸部CT等影像學(xué)檢查初步診斷為肺癌,未經(jīng)過手術(shù)治療、放射治療或化學(xué)治療的男性患者,經(jīng)術(shù)后病理診斷為非小細(xì)胞肺癌者入選為肺癌組(84例)。健康體檢的男性人群進(jìn)行吸煙問卷調(diào)查,入選健康吸煙組100例,入選健康不吸煙組49例。采集、分離獲得各組入選對(duì)象的空腹血清。選取肺癌組中肺腺癌和肺鱗癌血清樣品各5例、健康吸煙組和健康不吸煙組血清樣品各10例。將三組中的10例血清樣品等體積混合后,分別抽提

6、三組混合樣品的RNA。采用Exiqon的miRCURYTM LNA Array(v.16.0)進(jìn)行基因表達(dá)譜檢測(cè),獲取各組miRNA表達(dá)譜,分別比較各組間miRNA表達(dá)譜的差異性。②吸煙者血清let-7i-3p、miR-154-5p差異性表達(dá)及與肺癌變的關(guān)系。分別選取健康不吸煙組、健康吸煙組和肺癌組各30例樣品,對(duì)芯片結(jié)果顯示呈三倍及以上差異表達(dá)的miR-7-5p,miR-502-3p,miR-200c-5p, miR-1301, mi

7、R-129-2-3p、let-7i-3p、miR-196a-3p和miR-154-5p等8個(gè)miRNA進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證。驗(yàn)證后選取顯著下調(diào)表達(dá)的let-7i-3p和miR-154-5p兩個(gè)miRNA,分別增加健康不吸煙組、吸煙組、肺癌組標(biāo)本例數(shù)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè),并結(jié)合肺癌的病理類型、吸煙指數(shù)變化,分析比較三組間let-7i-3p和miR-154-5p表達(dá)水平與肺癌病理類型、吸煙指數(shù)變化的關(guān)系。通過mirbas、miranda

8、和targetscan三個(gè)數(shù)據(jù)庫對(duì)let-7i-3p和miR-154-5p進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),通過KEGG pathways對(duì)預(yù)測(cè)的靶基因進(jìn)行信號(hào)通路的預(yù)測(cè)分析,通過靶基因和信號(hào)通路的預(yù)測(cè)了解let-7i-3p和miR-154-5p在吸煙在肺癌變過程中的意義。
  結(jié)果:⑴miRNA芯片表達(dá)譜結(jié)果顯示,健康不吸煙組、健康吸煙組和肺癌三組血清樣品中448個(gè)miRNA顯示有陽性信號(hào),用于進(jìn)一步的數(shù)據(jù)分析表達(dá)。其中健康吸煙組與健康不吸煙組比

9、較有105個(gè)miRNA呈三倍及以上差異性表達(dá),其中上調(diào)和下調(diào)表達(dá)的miRNA分別為32個(gè)、75個(gè)。肺癌組與健康不吸煙組比較有163個(gè)miRNA呈三倍及以上差異性表達(dá),其中上調(diào)和下調(diào)表達(dá)的miRNA分別為74個(gè)、89個(gè)。兩組血清miRNA表達(dá)與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的肺癌組織中miRNA表達(dá)譜變化相似,均以miRNA下調(diào)表達(dá)為主。⑵在健康吸煙組與健康不吸煙組、肺癌組與健康不吸煙組比較中,兩者之間呈相同表達(dá)變化的miRNA有85個(gè),分別占健康吸煙組與

10、健康不吸煙組差異表達(dá) miRNA的80.95%(85/105)和肺癌組與健康不吸煙組的52.15%(85/163)。而肺癌組與健康不吸煙組、肺癌與吸煙組比較中,兩者間呈相同差異性表達(dá)的比率分別為16.56%(27/163)、36.98%(27/73)。三組間相互比較的結(jié)果表明健康吸煙與肺癌患者血清miRNA表達(dá)譜改變高度類似。觀察健康吸煙組與健康不吸煙組、肺癌組與健康不吸煙組中呈相同三倍及以上差異性表達(dá)的miRNA,均未發(fā)現(xiàn)在健康吸煙組

11、與健康不吸煙組、肺癌組與健康不吸煙組中存在相反表達(dá)的miRNA。提示肺癌血清的miRNA表達(dá)改變可能是吸煙誘導(dǎo)血清持續(xù)改表的結(jié)果。⑶根據(jù)miRNA芯片結(jié)果選取 miR-7-5p,miR-502-3p,miR-200c-5p,miR-1301, miR-129-2-3p、let-7i-3p、miR-196a-3p和miR-154-5p等miRNA進(jìn)行初步驗(yàn)證,結(jié)果發(fā)現(xiàn),let-7i-3p和miR-154-5p在健康吸煙組與健康不吸煙組、肺

12、癌組與健康不吸煙組比較中,呈顯著下調(diào)表達(dá)。增加三組的樣品量進(jìn)一步證實(shí),與健康不吸煙組相比,let-7i-3p、miR-154-5p在健康吸煙組和肺癌組中均呈下調(diào)表達(dá),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2. let-7i-3p相對(duì)表達(dá)水平與肺癌的病理類相關(guān)。與健康不吸煙組和健康吸煙組比較, let-7i-3p在肺鱗癌組中表達(dá)下調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; let-7i-3p在肺腺癌組中表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑷miR-154-5p相對(duì)表達(dá)水平在不同肺癌的病理類型中出現(xiàn)

13、相同的變化。與健康不吸煙組比較,miR-154-5p在鱗癌組和腺癌組中均呈表達(dá)下調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與健康吸煙組比較, miR-154-5p在鱗癌組和腺癌組中表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與腺癌組相比, miR-154-5p在鱗癌組中表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑸let-7i-3p和miR-154-5p的相對(duì)表達(dá)水平與吸煙指數(shù)的相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),隨著吸煙指數(shù)增加,let-7i-3p和miR-154-5p的相對(duì)表達(dá)水平水平逐漸降低。吸煙指數(shù)與let-7i-3

14、p和miR-154-5p的表達(dá)水平均呈負(fù)相關(guān)。⑹與健康不吸煙組相比,肺癌吸煙組和肺癌不吸煙組中的let-7i-3p均呈下調(diào)表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與健康吸煙組相比,肺癌不吸煙組中的let-7i-3p呈上調(diào)表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而肺癌吸煙組中的let-7i-3p的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與肺癌不吸煙組相比,肺癌吸煙組中的let-7i-3p的呈下調(diào)表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑺與健康不吸煙組比較,肺癌吸煙組及肺癌不吸煙組中的miR-154-5p

15、的表達(dá)均呈下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與健康吸煙組相比,肺癌吸煙組和肺癌不吸煙組中的miR-154-5p的表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與肺癌不吸煙組相比,肺癌吸煙組中的miR-154-5p的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑻通過靶基因預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),let-7i-3p作用的主要靶基因有Adhfe1、ACTB、ATP2A2、BDNF、BTG3、EMP2、DLX5、CXCR6、CXCL12、HES1、RASSF3、Six1等,這些靶基因的信號(hào)通路預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,其主要參

16、與與肺癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲關(guān)系密切的NF-kappa B、MAPK、Notch等信號(hào)通路。⑼通過靶基因預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),miR-154-5p作用的主要靶基因有 Abcc9、ROS、ATG7、TNFAIP3、CUL2等。這些靶基因的信號(hào)通路預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,其主要參與與肺癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲關(guān)系密切的NF-kappa B、HIF-1、MAPK、自噬分子調(diào)控等信號(hào)通路。
  結(jié)論:①吸煙可誘導(dǎo)人血清miRNA的差異表性表達(dá),表達(dá)譜以差異性下調(diào)表達(dá)為主

17、,其血清miRNA的表達(dá)譜變化與肺癌血清表達(dá)譜變化趨向一致,提示吸煙誘發(fā)的血清miRNA表達(dá)變化可能與肺癌的形成、發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。②吸煙可誘導(dǎo)血清let-7i-3p和miR-154-5p持續(xù)性下調(diào)表達(dá),與吸煙指數(shù)呈負(fù)相關(guān)。血清let-7i-3p和miR-154-5p在肺癌血清中呈下調(diào)表達(dá),let-7i-3p下調(diào)表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌病理類型有關(guān),miR-154-5p下調(diào)表達(dá)水平與吸煙史相關(guān),結(jié)果提示 let-7i-3p和miR-154-

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