Ras、FHIT、Bcl-2-Bax基因在肺癌中的異常及與吸煙關(guān)系的研究.pdf

1、　　目的 肺癌是人類最常見的惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展與多種基因異常有關(guān),同時(shí)吸煙與肺癌關(guān)系密切。Ras基因是癌基因,FHIT基因是抑癌基因,Bcl-2/Bax為凋亡相關(guān)基因,通過研究上述基因在肺癌組織中的異常,包括Ras基因的突變激活、FHIT基因的缺失及Bcl-2/Bax基因的異常表達(dá),探討與吸煙及臨床病理特征的關(guān)系。了解肺癌的發(fā)生機(jī)制及吸煙致癌的分子靶點(diǎn),為社會(huì)控?zé)熂胺伟╊A(yù)防及基因診療提供理論依據(jù)。
　　方法 隨機(jī)選擇36例臨床確

2、診為肺癌且手術(shù)治療的患者,術(shù)中采集肺癌及正常肺組織標(biāo)本,置于-80℃冰箱保存新鮮組織及10%福爾馬林固定標(biāo)本。對(duì)每例病人臨床資料進(jìn)行詳細(xì)記錄包括術(shù)前詳細(xì)的吸煙情況,術(shù)后病理特征。按吸煙情況及臨床病理特征進(jìn)行分組對(duì)比。分別采用以下方法對(duì)每例病人標(biāo)本進(jìn)行Ras、FHIT及Bcl-2/Bax基因異常情況進(jìn)行研究。
　　(1)聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)法對(duì)新鮮冷凍標(biāo)本進(jìn)行K-ras基因突變情況檢測,分析ras

3、基因突變情況及與吸煙及與臨床病理特征的關(guān)系。
　　(2)免疫組化S-P法檢測福爾馬林固定標(biāo)本肺癌及正常肺組織中P21蛋白的山東大學(xué)博士學(xué)位論文表達(dá)情況,比較其異常表達(dá)與吸煙及臨床病理特征的關(guān)系。 (3)應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測冷凍新鮮標(biāo)本中FHIT基因的異常轉(zhuǎn)錄情況,了解肺癌組織中FHIT基因缺失情況及與吸煙及臨床病理特征的關(guān)系,以及外顯子缺失的部位。 (4)免疫組化S一P法測定福爾馬林固定標(biāo)本FHIT蛋白的表達(dá)情況,比較肺癌組織

4、中FHIT蛋白表達(dá)水平與吸煙及與臨床病理特征的關(guān)系。 (5)免疫組化S一P法檢測肺癌及正常肺組織中凋亡相關(guān)基因Bd一2和bax蛋白的表達(dá)情況,比較其異常表達(dá)與吸煙及臨床病理特征的關(guān)系。 采用尸檢驗(yàn),應(yīng)用sAs6.2軟件對(duì)全部數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,p<；0 .05為顯著性差異。 結(jié)果 (1) Ras基因的突變?cè)诜伟┙M織中明顯高于正常肺組織(p<；0 .01),且吸煙組明顯高于非吸煙組；鱗癌高于腺癌,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組突變率較高。 (2)PZ；蛋

5、白在肺癌組織中表達(dá)水平明顯高于正常肺組織,吸煙組高于非吸煙組(p<；0.01)與Ras基因突變情況一致。Nsclc高于Sclc,鱗癌高于腺癌,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。后者提示PZI過度表達(dá)預(yù)示患者預(yù)后不良。 (3)FHIT基因在肺癌中有較高的缺失,表現(xiàn)為異常轉(zhuǎn)錄本的出現(xiàn)。且表現(xiàn)為外顯子5的丟失。FHIT缺失吸煙組高于非吸煙組,鱗癌高于腺癌,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。 (4)FHIT蛋白在肺癌組織中表達(dá)水平明顯低于正常肺

6、組織,吸煙組低于非吸煙組(p<；0.01),Sdc低于Nsclc,鱗癌低于腺癌,與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)。 (5)凋亡相關(guān)基因Bcl一2/Bax在肺癌組織中均有異常表達(dá),二者為負(fù)相關(guān)關(guān)系,Bcl一2在肺癌組織中為高表達(dá),Bax在肺癌中為低表達(dá),Bcl一2蛋白表達(dá)吸煙組明顯高于非吸煙組(p<；0.01),Sclc高于Nsclc,鱗癌高于腺癌,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于非轉(zhuǎn)移組；Bax蛋白表達(dá)吸煙組明顯低于非吸煙組(p<；0.01),Sclc

7、低于Nsclc,鱗癌低于腺癌,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組低于非轉(zhuǎn)移組。 結(jié)論山東大學(xué)博士學(xué)位論文 (l)癌基因Ras、抑癌基因FHrr及凋亡相關(guān)基因Bcl一2舊ax均與肺癌關(guān)系密切,其異常在肺癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用。 (2)Ras基因在肺癌中的異常以突變?yōu)橹?FHIT基因在肺癌中的異常以缺失為主,且常常缺失外顯子5。二者的異常均與吸煙有關(guān),提示可能為煙草致癌的分子靶點(diǎn)。FHIT基因缺失可能成為基因治療肺癌途徑之一。 (3) PZ,及FHIT蛋白在肺癌

8、組織中均有異常表達(dá)。前者為高表達(dá),后者為低表達(dá),且都與吸煙有關(guān),可作為肺癌診斷的參考標(biāo)志物,亦從蛋白水平反映了RaS及FHIT基因的異常情況。PZ,的過度表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān),提示病人預(yù)后不良。 (4)凋亡抑制基因Bcl一2和凋亡促進(jìn)基因Bax在肺癌中均有異常表達(dá),二者是負(fù)相關(guān),說明凋亡作用的失衡在肺癌發(fā)生中起重要作用。二者表達(dá)與吸煙有關(guān),提示吸煙對(duì)機(jī)體細(xì)胞凋亡亦有一定的影響。關(guān)鍵詞肺癌基因異常Ras FHIT PZ一Bel一2 Ba