FHIT基因在人肺癌變過程中作用的研究.pdf

1、我們首先將人FHIT基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA3.1/Hygro(+)/FHIT導(dǎo)入不表達(dá)內(nèi)源性Fhit蛋白的永生化人支氣管上皮細(xì)胞Y-BE,獲得了穩(wěn)定高表達(dá)Fhit蛋白的細(xì)胞亞群Y-BE/FHIT.隨后我們分析了外源性FHIT基因表達(dá)對Y-BE細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,包括細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡.結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染空載體的對照Y-BE/pcDNA3.1細(xì)胞與親本細(xì)胞Y-BE(p92)相比,生長速度無明顯差異,而Y-BE/FHI

2、T細(xì)胞的生長速度則明顯慢于前兩者,提示Fhit蛋白的高表達(dá)有抑制細(xì)胞的體外生長的作用.采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行的細(xì)胞周期分析顯示,Y-BE/FHIT細(xì)胞G2期DNA的百分含量是Y/pcDNA3.1細(xì)胞的1.7倍,提示Y-BE/FHIT細(xì)胞發(fā)生了G2/M期阻滯;Western Blot分析發(fā)現(xiàn)的Cyclin B1蛋白表達(dá)水平的下調(diào)可能是G2期細(xì)胞含量增加的機(jī)制之一.用Annexin V進(jìn)行的細(xì)胞凋亡檢測表明:Y-BE/FHIT細(xì)胞的早期凋亡高于