CFTR介導(dǎo)脂氧素A4對(duì)內(nèi)毒素性肺損傷肺泡液體清除的作用.pdf

1、目的:急性肺損傷(ALI)是臨床常見(jiàn)的急危重癥，以肺泡-毛細(xì)血管屏障滲透性增加，肺水腫形成為特征。增加肺泡液體清除(AFC)能改善ALI患者預(yù)后。以往對(duì)AFC的研究主要集中在轉(zhuǎn)運(yùn)鈉離子的通道，現(xiàn)有研究表明囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)體(CFTR)氯離子通道在AFC中有關(guān)鍵作用。促炎癥消退介質(zhì)脂氧素A4(LXA4)具有抗炎促消退作用。在ALI中，脂氧素A4對(duì)AFC及CFTR的作用缺乏相應(yīng)的研究。因此，本研究通過(guò)脂多糖誘導(dǎo)的ALI動(dòng)物和細(xì)胞模型，

2、探討脂氧素A4對(duì)AFC的影響及其與CFTR的作用。
　　 方法:
　　 1.動(dòng)物準(zhǔn)備:將大鼠隨機(jī)分為四組:①空白對(duì)照組（大鼠不給予任何藥物）;②LPS組(大鼠尾靜脈注射LPS:20mg/kg);③LPS+LXA4組（大鼠尾靜脈注射LPS后6h，經(jīng)尾靜脈給予2μg/kg LXA4，繼續(xù)作用1h）;④LPS+LXA4+CFTRinh-172組(大鼠給予LPS和LXA4后，經(jīng)氣管導(dǎo)管給予10-6mol/mlCFTRinh-17

3、2)。
　　 2.AFC的測(cè)量:大鼠給予內(nèi)毒素6h后，氣管插管，左肺注入依文思藍(lán)標(biāo)記的牛血清蛋白溶液，機(jī)械通氣1h，計(jì)算機(jī)械通氣前后蛋白濃度變化，測(cè)出肺泡液體清除率。
　　 3.用ELISA方法測(cè)定各組大鼠肺組織中IL-6和TNF-α水平，用HE染色觀察肺組織結(jié)構(gòu)變化。Western blot和免疫組化分析肺組織中CFTR蛋白水平。
　　 4.將分離培養(yǎng)的大鼠原代肺泡二型上皮細(xì)胞(AT(II))分為三組:①空白對(duì)

4、照組;②LPS（1μg/ml）組;③LPS+LXA4(1μg/ml+1×10-7mol/ml LXA4)組。藥物刺激6h后用western blot方法檢測(cè)大鼠肺泡二型上皮細(xì)胞上CFTR的蛋白表達(dá)情況。
　　 5.所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，GraphPad Prism5軟件進(jìn)行分析處理，所有數(shù)據(jù)用單因素方差分析(one-way ANOVA)和Student-Newman-Keuls post hoc檢驗(yàn)進(jìn)行組間比

5、較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.LXA4對(duì)LPS誘導(dǎo)的ALI的影響:肺組織HE染色切片中空白對(duì)照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰，肺泡腔內(nèi)干凈;LPS組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，并有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);LPS+LXA4組大鼠肺組織稍亂，有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 2.ELISA結(jié)果顯示:與空白對(duì)照組相比，LPS組中IL-6和TNF-α顯著升高(P＜0.05)，LXA4能顯著下調(diào)TNF-α水平(P＜0.05)

6、，同時(shí)，IL-6水平也被下降到空白對(duì)照組水平。
　　 3.LXA4對(duì)AFC的影響:與空白對(duì)照組相比，LPS能顯著降低AFC(P＜0.05);在LPS誘導(dǎo)的ALI大鼠，LXA4能顯著增加AFC(P＜0.05)，而LXA4對(duì)AFC的作用能被CFTRinh-172（CFTR氯離子通道抑制劑）抑制。
　　 4.LXA4對(duì)CFTR蛋白表達(dá)的影響:在LPS誘導(dǎo)ALI大鼠模型中，western blot檢測(cè)結(jié)果顯示LPS能下調(diào)CFTR

7、蛋白表達(dá)水平，與LPS組相比，LPS+LXA4組能增加CFTR蛋白表達(dá)水平，免疫組化結(jié)果與該結(jié)果一致。在大鼠原代肺泡二型上皮細(xì)胞中，western blot檢測(cè)結(jié)果顯示LPS能顯著下調(diào)CFTR蛋白表達(dá)水平(P＜0.05)，與LPS組相比，LPS+LXA4組顯著增加CFTR蛋白表達(dá)水平(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.LXA4能減輕LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷，減少促炎介質(zhì)的產(chǎn)生;
　　 2.LXA4能顯著提高