前列腺癌冷凍免疫反應(yīng)與原位腫瘤疫苗的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：冷凍消融技術(shù)逐漸發(fā)展成為局限性前列腺癌的一線治療手段，冷凍免疫反應(yīng)研究將冷凍消融局部治療與全身免疫治療有機(jī)結(jié)合起來(lái)，為腫瘤綜合治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的：評(píng)價(jià)冷凍消融治療前列腺癌移植瘤后對(duì)機(jī)體抗腫瘤免疫狀態(tài)的影響，探討冷凍消融聯(lián)合GM-CSF制作體內(nèi)原位腫瘤疫苗的可行性與有效性。 材料與方法：復(fù)制RM-1細(xì)胞激素非依賴性前列腺癌肺轉(zhuǎn)移模型，將動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組、手術(shù)切除組、冷凍治療組、GM-CSF治療組、冷凍+

2、GM-CSF治療組。利用Endocare公司氬氦冷凍系統(tǒng)直徑2mm冷凍針行皮下移植瘤冷凍消融治療。HE染色觀察腫瘤引流淋巴結(jié)和肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率；免疫組織化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)評(píng)價(jià)腫瘤局部、引流淋巴結(jié)、脾臟DC的數(shù)量及活化比例；ELISPOT法檢測(cè)引流淋巴結(jié)、脾臟CD4+T細(xì)胞腫瘤特異性IFN-γ分泌情況；LDH法檢測(cè)引流淋巴結(jié)、脾臟CD8+CTL細(xì)胞腫瘤殺傷活性；ELISA法檢測(cè)外周血IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10水平，以IFN-γ

3、/IL-4計(jì)算Th1/Th2。 結(jié)果：（1）冷凍消融術(shù)前、術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后21天外周血Th1/Th2比值分別為6．2±0．58、9．30±0．73、13．71±0．57、10．31±0．30（P<0．05）；（2）冷凍消融術(shù)前、術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后21天，腫瘤引流淋巴結(jié)CD4+T細(xì)胞由前列腺癌細(xì)胞刺激后IFN-γ分泌陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)每106 T細(xì)胞分別為23．2±1．48、243．4±46．21、95．8±6．83、2

4、5．2±1．64（P<0．05），而腎癌細(xì)胞刺激后IFN-γ分泌無(wú)變化。脾臟CD4+T細(xì)胞由腎癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞刺激后IFN-γ分泌均沒(méi)有明顯變化；（3）冷凍消融術(shù)前、術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后21天，腫瘤引流淋巴結(jié)CD8+CTL對(duì)前列腺癌細(xì)胞殺傷活性分別為（14．8±0．84）%、（62．6±2．30）%、（49．8±3．70）%、（15．6±1．14）%，對(duì)腎癌細(xì)胞殺傷活性無(wú)明顯變化，而脾臟CD8+CTL對(duì)前列腺癌細(xì)胞、腎癌細(xì)胞殺

5、傷活性均沒(méi)有明顯變化；（4）冷凍消融治療術(shù)前、術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后21天腫瘤局部DC數(shù)量分別為每高倍視野下（1．6±0．55）個(gè)、（8．6±1．14）個(gè)、（4．4±1．14）個(gè)、（1．8±0．84）個(gè)（P<0．05），引流淋巴結(jié)DC比例分別為（3．84±0．50）%、（8．56±0．50）%、（5．32±0．39）%、（3．66±0．51）%（P<0．05），DC活化比例分別為（11．2±0．84）%、（25．8±0．84）%、（

6、18．6±1．52）%、（11．6±1．14）%（P<0．05），而脾臟DC數(shù)量及活化比例無(wú)明顯變化；（5）相關(guān)性分析表明引流淋巴結(jié)CD4+T細(xì)胞、CD8+CTL細(xì)胞的腫瘤特異性免疫反應(yīng)與DC比例及活化直接相關(guān)（P<0．05）；（6）冷凍+GM-CSF治療術(shù)前、術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后21天腫瘤局部DC數(shù)量分別為每高倍視野下（1．6±0．55）個(gè)、（18．4±1．14）、（15．8±0．84）、（8．2±1．30）個(gè)（P<0．05），

7、引流淋巴結(jié)DC數(shù)量比例分別為（3．88±0．31）%、（13．38±1．18）%、（11．08±0．84）%、（9．14±0．34）%（P<0．05），DC活化比例分別為（11．2±0．84）%、（31．4±1．82）%、（24．8±0．84）%、（19．0±1．58）%（P<0．05）；而脾臟DC數(shù)量比例分別為（4．80±0．20）%、（13．2±1．30）%、（9．16±0．47）%、（6．94±0．32）%（P<0．05），DC活

8、化比例分別為（12．8±1．3）%、（32．8±2．39）%、（26．4±1．14）%、（21．0±1．58）%（P<0．05）；（7）冷凍+GM-CSF治療術(shù)前、術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后21天，腫瘤引流淋巴結(jié)CD4+T細(xì)胞由前列腺癌細(xì)胞刺激后IFN-γ分泌陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)每106 T細(xì)胞分別為23．2±1．48、360．4±4．28、239．8±4．66、109．8±6．94（P<0．05），而腎癌細(xì)胞刺激后IFN-γ分泌無(wú)變化。脾臟CD

9、4+T細(xì)胞由前列腺癌細(xì)胞刺激后IFN-γ分泌陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)每106 T細(xì)胞分別為23．6±1．14、129．8±3．49、91．0±2．92、46．6±3．29（P<0．05），而腎癌細(xì)胞刺激后IFN-γ分泌無(wú)變化；（8）冷凍+GM-CSF治療術(shù)前、術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后21天，腫瘤引流淋巴結(jié)CTL對(duì)前列腺癌細(xì)胞殺傷活性分別為（14．8±0．84）%、（75．6±1．14）%、（64．6±1．52）%、（37．6±2．07）%（P<0．

10、05），對(duì)腎癌細(xì)胞殺傷活性治療前后無(wú)明顯變化。脾臟CTL對(duì)前列腺癌細(xì)胞殺傷活性分別為（12．8±0．84）%、（47．4±1．14）%、（40．4±1．82）%、（32．2±1．48）%（P<0．05），對(duì)腎癌細(xì)胞殺傷活性治療前后無(wú)明顯變化；（9）冷凍+GM-CSF治療術(shù)前、術(shù)后7天、術(shù)后14天、術(shù)后21天外周血Th1/Th2比值分別為6．24±0．58、13．16±0．38、14．91±0．63、15．13±0．50（P<0．05）；

11、（10）冷凍消融組、冷凍+GM-CSF治療組術(shù)后21天淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率分別為80%、40%，肺轉(zhuǎn)移率分別為80%、20%，中位生存期分別為（55．0±1．38）天、（72．4±1．84）天。 結(jié)論：冷凍消融治療可升高Th1/Th2比值，誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤免疫向Th1優(yōu)勢(shì)轉(zhuǎn)化，但隨時(shí)間延長(zhǎng)有逐漸降低趨勢(shì)。冷凍消融可誘導(dǎo)局部引流淋巴結(jié)T細(xì)胞的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)，但不能誘導(dǎo)脾臟T細(xì)胞的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)。冷凍消融誘導(dǎo)的腫瘤特異性免疫反應(yīng)與