真菌提取物對旋毛蟲病治療的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 探討真菌提取物在不同濃度下，對旋毛蟲病鼠驅蟲效果、抑殺蟲體作用環(huán)節(jié)、對蟲體生物活性的影響。同時，觀察真菌提取物在對旋毛蟲病鼠進行治療前后，對宿主腸道黏膜免疫活性的影響。
　　 方法:
　　 首先應用計數(shù)法，對旋毛蟲囊包計數(shù)。用口飼法感染小鼠，建立旋毛蟲病動物模型。將感染陽性小鼠隨機分為4個組:三個不同濃度的實驗治療組(A1:50mg/kg;A2:100mg/kg;A3:200mg/kg)，一個陽性模

2、型對照組（Y組）。同時，設立一個陰性正常對照組（Z組）。每組鼠數(shù)6只。實驗治療組小鼠在感染旋毛蟲后的第5天，給予不同濃度藥物進行3天的治療，并于停藥后2天處死所有小鼠。同時，將陽性模型對照組（Y組）和陰性正常對照組（Z組）的小鼠亦處死。將所有收集的小鼠腸道回盲部旋毛蟲成蟲，計數(shù)，計算蟲體負荷和減蟲率。從各組實驗組隨機取部分旋毛蟲成蟲，用卡紅染料進行染色和采用透射電鏡檢查，以觀察不同實驗組鼠應用不同濃度藥物作用后，對其體內(nèi)旋毛蟲成蟲外部形

3、態(tài)、內(nèi)部結構、發(fā)育狀況的影響，以及分析該藥抑殺蟲體的作用機制和部位。另外，取各實驗組小鼠用藥前后部分回腸腸壁組織、回腸和回盲部腸黏膜分泌物，分別做小鼠腸黏膜固有層FAS蛋白和SIgA分泌水平的測定和觀察。上述各組所得數(shù)據(jù)均進行統(tǒng)計學比對分析。
　　 結果:
　　 （一）藥物驅蟲效果的觀察
　　 A1、A2和A3三個藥物治療組的成蟲負荷和減蟲率分別為57.1％、78.1％和96.2％。這三個治療組成蟲負荷和減蟲率效

4、果與陽性模型對照組（Y組）相比較，經(jīng)統(tǒng)計學處理發(fā)現(xiàn)具有顯著性差異(P＜0.05);A1、A2、A3三個用藥治療組之間的成蟲負荷和減蟲率效果比較亦具有顯著性差異(P＜0.05)，其中以A3治療組驅蟲效果最好。
　　 （二）驅蟲藥物對蟲體作用的觀察
　　 從A1、A2和A3三個藥物治療組和陽性模型對照組（Y組）小鼠腸道收集的成蟲，用形態(tài)學分析測量軟件在光鏡下測量蟲體平均大小:A1組蟲體長寬為1278.95±68.89×49.

5、97±8.83;A2組蟲體長寬為1213.45±88.04×38.91±5.76;A3組蟲體長寬為1122.34±42.88×33.80±6.22;Y組組蟲體長寬為1305.55±53.90×57.47±5.76。4個組組間和組內(nèi)進行統(tǒng)計學比較分析無明顯的差異(P＞0.05)。但在光鏡下進行觀察，這4個組組間和組內(nèi)蟲體由于殺蟲藥物的作用和影響，呈現(xiàn)蟲體變小或發(fā)育不均等狀況。
　　 （三）藥物作用蟲體電鏡下的觀察
　　 陽

6、性模型對照組所獲旋毛蟲表皮完整、光滑、無缺。成蟲腸上皮細胞頂端的微絨毛結構完整，排列規(guī)則整齊，形成刷狀緣。由于真菌提取物的藥物作用:A1、A2、A3組的成蟲表皮均出現(xiàn)粗糙，凹凸不平的現(xiàn)象。其中A1組成蟲腸道上皮頂端的微絨毛結構完整性遭到破壞，排列不規(guī)整，稀疏且長短不一，部分腸微絨毛開始出現(xiàn)倒伏;A2組成蟲腸微絨毛不僅出現(xiàn)倒伏，且微絨毛變短變小，生長受限。A3組成蟲腸微絨毛遭到嚴重的破壞，出現(xiàn)彼此融合或缺損等嚴重的病理變化。
　　

7、 （四）小鼠腸黏膜固有層FAS蛋白的表達
　　 所有實驗小鼠腸黏膜固有層FAS蛋白的表達是采用免疫組織化學染色，然后經(jīng)灰度分析軟件分析，結果如下:Y組小鼠腸黏膜固有層FAS蛋白表達的平均光密度值為0.2195±0.0160，相較于Z組的0.1099±0.0042明顯升高(P＜0.05)。在實驗組小鼠用藥后，并隨著用藥濃度的增加，F(xiàn)AS蛋白的表達水平逐漸下降，其中A1:0.1541±0.0055;A2:0.1268±0.0074;

8、A3:0.0944±0.0046，三個組間小鼠FAS蛋白的表達水平進行統(tǒng)計學分析呈現(xiàn)出顯著性差異(P＜0.05)。A3組小鼠在應用大劑量殺蟲藥物后，小鼠FAS蛋白的表達水平回復，并與正常陰性對照Z組水平接近。
　　 （五）小鼠SIgA分泌的水平
　　 所有實驗小鼠腸黏膜SIgA分泌的水平經(jīng)檢測，結果如下:Y組宿主小腸液SIgA分泌量為897.2473±20.3669，相較于Z組的79.0611±4.9235明顯升高(P＜

9、0.05)。A1、A2和A3三個藥物治療組小鼠在用藥后，并伴隨著用藥濃度的增加，腸黏膜SIgA的分泌量逐漸下降，其中A1:140.0946±14.5452;A2:100.1102±7.5841;A3:63.8602±8.7385。三個用藥組間進行統(tǒng)計學分析也有明顯的差異(P＜0.05)。同樣A3組小鼠在應用大劑量殺蟲藥物后，小腸黏膜SIgA的分泌量回復，并與正常陰性對照Z組水平接近。
　　 結論:
　　 （一）真菌提取物

10、對旋毛蟲成蟲有較好的抑殺作用，并對旋毛蟲成蟲體表和其消化系統(tǒng)產(chǎn)生明顯破壞作用。抑殺蟲體作用機制可能的原因是因為該藥抑制旋毛蟲NFRD的生物活性，引發(fā)能量代謝紊亂，最終導致蟲體因能量耗竭逐漸死亡，并排出體外。真菌提取物最佳的殺蟲藥物濃度是200mg/kg。
　　 （二）真菌提取物通過直接或間接方式下調(diào)腸黏膜固有層FAS蛋白的表達，修復由于旋毛蟲感染損害引發(fā)腸黏膜上皮細胞出現(xiàn)大量程序死亡的病理生理學改變。
　　 （三）真菌提