真菌提取物對旋毛蟲病治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 探討真菌提取物在不同濃度下，對旋毛蟲病鼠驅(qū)蟲效果、抑殺蟲體作用環(huán)節(jié)、對蟲體生物活性的影響。同時(shí)，觀察真菌提取物在對旋毛蟲病鼠進(jìn)行治療前后，對宿主腸道黏膜免疫活性的影響。
　　 方法:
　　 首先應(yīng)用計(jì)數(shù)法，對旋毛蟲囊包計(jì)數(shù)。用口飼法感染小鼠，建立旋毛蟲病動(dòng)物模型。將感染陽性小鼠隨機(jī)分為4個(gè)組:三個(gè)不同濃度的實(shí)驗(yàn)治療組(A1:50mg/kg;A2:100mg/kg;A3:200mg/kg)，一個(gè)陽性模

2、型對照組（Y組）。同時(shí)，設(shè)立一個(gè)陰性正常對照組（Z組）。每組鼠數(shù)6只。實(shí)驗(yàn)治療組小鼠在感染旋毛蟲后的第5天，給予不同濃度藥物進(jìn)行3天的治療，并于停藥后2天處死所有小鼠。同時(shí)，將陽性模型對照組（Y組）和陰性正常對照組（Z組）的小鼠亦處死。將所有收集的小鼠腸道回盲部旋毛蟲成蟲，計(jì)數(shù)，計(jì)算蟲體負(fù)荷和減蟲率。從各組實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)取部分旋毛蟲成蟲，用卡紅染料進(jìn)行染色和采用透射電鏡檢查，以觀察不同實(shí)驗(yàn)組鼠應(yīng)用不同濃度藥物作用后，對其體內(nèi)旋毛蟲成蟲外部形

3、態(tài)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、發(fā)育狀況的影響，以及分析該藥抑殺蟲體的作用機(jī)制和部位。另外，取各實(shí)驗(yàn)組小鼠用藥前后部分回腸腸壁組織、回腸和回盲部腸黏膜分泌物，分別做小鼠腸黏膜固有層FAS蛋白和SIgA分泌水平的測定和觀察。上述各組所得數(shù)據(jù)均進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比對分析。
　　 結(jié)果:
　　 （一）藥物驅(qū)蟲效果的觀察
　　 A1、A2和A3三個(gè)藥物治療組的成蟲負(fù)荷和減蟲率分別為57.1％、78.1％和96.2％。這三個(gè)治療組成蟲負(fù)荷和減蟲率效

4、果與陽性模型對照組（Y組）相比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理發(fā)現(xiàn)具有顯著性差異(P＜0.05);A1、A2、A3三個(gè)用藥治療組之間的成蟲負(fù)荷和減蟲率效果比較亦具有顯著性差異(P＜0.05)，其中以A3治療組驅(qū)蟲效果最好。
　　 （二）驅(qū)蟲藥物對蟲體作用的觀察
　　 從A1、A2和A3三個(gè)藥物治療組和陽性模型對照組（Y組）小鼠腸道收集的成蟲，用形態(tài)學(xué)分析測量軟件在光鏡下測量蟲體平均大小:A1組蟲體長寬為1278.95±68.89×49.

5、97±8.83;A2組蟲體長寬為1213.45±88.04×38.91±5.76;A3組蟲體長寬為1122.34±42.88×33.80±6.22;Y組組蟲體長寬為1305.55±53.90×57.47±5.76。4個(gè)組組間和組內(nèi)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析無明顯的差異(P＞0.05)。但在光鏡下進(jìn)行觀察，這4個(gè)組組間和組內(nèi)蟲體由于殺蟲藥物的作用和影響，呈現(xiàn)蟲體變小或發(fā)育不均等狀況。
　　 （三）藥物作用蟲體電鏡下的觀察
　　 陽

6、性模型對照組所獲旋毛蟲表皮完整、光滑、無缺。成蟲腸上皮細(xì)胞頂端的微絨毛結(jié)構(gòu)完整，排列規(guī)則整齊，形成刷狀緣。由于真菌提取物的藥物作用:A1、A2、A3組的成蟲表皮均出現(xiàn)粗糙，凹凸不平的現(xiàn)象。其中A1組成蟲腸道上皮頂端的微絨毛結(jié)構(gòu)完整性遭到破壞，排列不規(guī)整，稀疏且長短不一，部分腸微絨毛開始出現(xiàn)倒伏;A2組成蟲腸微絨毛不僅出現(xiàn)倒伏，且微絨毛變短變小，生長受限。A3組成蟲腸微絨毛遭到嚴(yán)重的破壞，出現(xiàn)彼此融合或缺損等嚴(yán)重的病理變化。
　　

7、 （四）小鼠腸黏膜固有層FAS蛋白的表達(dá)
　　 所有實(shí)驗(yàn)小鼠腸黏膜固有層FAS蛋白的表達(dá)是采用免疫組織化學(xué)染色，然后經(jīng)灰度分析軟件分析，結(jié)果如下:Y組小鼠腸黏膜固有層FAS蛋白表達(dá)的平均光密度值為0.2195±0.0160，相較于Z組的0.1099±0.0042明顯升高(P＜0.05)。在實(shí)驗(yàn)組小鼠用藥后，并隨著用藥濃度的增加，F(xiàn)AS蛋白的表達(dá)水平逐漸下降，其中A1:0.1541±0.0055;A2:0.1268±0.0074;

8、A3:0.0944±0.0046，三個(gè)組間小鼠FAS蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析呈現(xiàn)出顯著性差異(P＜0.05)。A3組小鼠在應(yīng)用大劑量殺蟲藥物后，小鼠FAS蛋白的表達(dá)水平回復(fù)，并與正常陰性對照Z組水平接近。
　　 （五）小鼠SIgA分泌的水平
　　 所有實(shí)驗(yàn)小鼠腸黏膜SIgA分泌的水平經(jīng)檢測，結(jié)果如下:Y組宿主小腸液SIgA分泌量為897.2473±20.3669，相較于Z組的79.0611±4.9235明顯升高(P＜

9、0.05)。A1、A2和A3三個(gè)藥物治療組小鼠在用藥后，并伴隨著用藥濃度的增加，腸黏膜SIgA的分泌量逐漸下降，其中A1:140.0946±14.5452;A2:100.1102±7.5841;A3:63.8602±8.7385。三個(gè)用藥組間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析也有明顯的差異(P＜0.05)。同樣A3組小鼠在應(yīng)用大劑量殺蟲藥物后，小腸黏膜SIgA的分泌量回復(fù)，并與正常陰性對照Z組水平接近。
　　 結(jié)論:
　　 （一）真菌提取物

10、對旋毛蟲成蟲有較好的抑殺作用，并對旋毛蟲成蟲體表和其消化系統(tǒng)產(chǎn)生明顯破壞作用。抑殺蟲體作用機(jī)制可能的原因是因?yàn)樵撍幰种菩xNFRD的生物活性，引發(fā)能量代謝紊亂，最終導(dǎo)致蟲體因能量耗竭逐漸死亡，并排出體外。真菌提取物最佳的殺蟲藥物濃度是200mg/kg。
　　 （二）真菌提取物通過直接或間接方式下調(diào)腸黏膜固有層FAS蛋白的表達(dá)，修復(fù)由于旋毛蟲感染損害引發(fā)腸黏膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)大量程序死亡的病理生理學(xué)改變。
　　 （三）真菌提