外源性NO對旋毛蟲肌幼蟲殺傷作用及其機制研究.pdf

1、目的:初步觀察外源性NO對旋毛蟲肌幼蟲的殺傷作用和對旋毛蟲肌幼蟲細胞凋亡的誘導作用及其相關機制探討。
　　方法:取河南株旋毛蟲感染的BALB/c小鼠肌肉組織消化,分離幼蟲配制成懸液。48孔板中每孔加入蟲體混懸液,再加入各組試劑,余下用不完全RPMI-1640培養(yǎng)液補充至1ml。各實驗組SNP分別為0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L;SNP+血紅蛋白(Hb)0.15mmol/L、SNP+FeSO4

2、0.15mmol/L、SNP+L-cyst1.00mmol/L、SNP+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L,后4組SNP濃度均為1.00mmol/L,設空白對照組,每組重復3次,置37℃5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在4天內(nèi)連續(xù)每天觀察,鏡檢蟲體,計算第2、3、4天蟲體死亡率。培養(yǎng)結(jié)束后收集蟲體采用熒光(Hoechst33342、碘化丙啶)雙染法、HE染色和TUNEL法原位檢測細胞凋亡,并用透射電鏡觀察殺傷后肌幼

3、蟲細胞凋亡變化,統(tǒng)計分析第4天各實驗組對旋毛蟲肌幼蟲殺傷的差異。
　　結(jié)果:1.在體外培養(yǎng)第2、3、4天,SNP0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L組旋毛蟲肌幼蟲死亡率均高于空白對照組,且死亡率隨SNP濃度上升、用藥時間延長而升高。2.于培養(yǎng)第4天,除SNP0.02mmol/L組與空白對照組死亡率比較檢驗無統(tǒng)計學意義(P>0.05),SNP0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/

4、L實驗組與空白對照組死亡率比較檢驗均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),SNP0.20mmol/L與SNP0.50mmol/L實驗組死亡率比較檢驗無統(tǒng)計學意義;加入不同抑制劑后,SNP1.00mmol/L實驗組與SNP+Hb0.15mmol/L、SNP+FeSO40.15mmol/L、SNP+L-cyst1.00mmol/L、SNP+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L各實驗組死亡率比較檢驗均具有統(tǒng)計學意義(P<0

5、.05),SNP1.00mmol/L+Hb0.15mmol/L與SNP1.00mmol/L+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L實驗組死亡率比較檢驗無統(tǒng)計學意義,SNP1.00mmol/L+FeSO40.15mmol/L與SNP1.00mmol/L+L-cyst1.00mmol/L實驗組死亡率比較檢驗無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。3.Hoechst33342和碘化丙啶雙染,于不同濃度SNP實驗組觀察到發(fā)出強藍

6、、弱紅熒光的死亡蟲體;TUNEL法中在SNP1.00mmol/L實驗組蟲體切片中觀察到散在單一分布染成棕褐色的凋亡細胞;透射電鏡在SNP1.00mmol/L實驗組肌幼蟲切片中觀察到較典型的凋亡細胞形態(tài);HE染色法無法區(qū)別細胞凋亡與否。
　　結(jié)論:外源性NO對旋毛蟲肌幼蟲具有殺傷作用,且這種作用在一定濃度范圍內(nèi)還存在劑量效應;外源性NO對旋毛蟲肌幼蟲細胞具有誘導凋亡作用;Hb、FeSO4、L-cyst對外源性NO的殺傷具有抑制作用。