RCS大鼠視網(wǎng)膜重構(gòu)中谷氨酸變化對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的影響研究.pdf

1、目的：
　　通過研究RCS大鼠視網(wǎng)膜重構(gòu)過程中谷氨酸的釋放、攝取和轉(zhuǎn)化各階段的變化規(guī)律,以及谷氨酸作為神經(jīng)遞質(zhì)的輸出改變對(duì)視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞功能的影響,進(jìn)而揭示視網(wǎng)膜變性過程中谷氨酸改變對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活的影響,以及變性過程中視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞電生理功能的改變,為視網(wǎng)膜變性后神經(jīng)元的保護(hù)、視功能挽救和重建提供線索,為視網(wǎng)膜重構(gòu)的基礎(chǔ)研究和臨床治療研究提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、采用免疫組織化學(xué)技術(shù)研究重構(gòu)視網(wǎng)膜中蛋

2、白激酶C的α亞單位(PKCα)和谷氨酰胺合成酶(GS)的分布;實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)重構(gòu)視網(wǎng)膜中PKCα與VGLUT-1mRNA表達(dá)量的變化規(guī)律;
　　2、Western免疫印跡技術(shù)檢測(cè)視網(wǎng)膜中GLAST蛋白和GS蛋白的表達(dá)水平;
　　3、膜片鉗技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞對(duì)谷氨酸的電生理反應(yīng)性,最終闡明視網(wǎng)膜變性過程中,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的電生理功能的變化規(guī)律。
　　結(jié)果：

3、>　　1.RCS大鼠視網(wǎng)膜變性首先累及光感受器細(xì)胞,存活的視桿雙極細(xì)胞所占百分比隨變性發(fā)展逐漸增高;到視網(wǎng)膜變性晚期,內(nèi)核層和節(jié)細(xì)胞層的細(xì)胞仍有大量殘留。
　　2.RCS大鼠視網(wǎng)膜變性發(fā)展到中后期,作為神經(jīng)遞質(zhì)的谷氨酸釋放逐漸增多,但Müller細(xì)胞攝取谷氨酸的能力并不相應(yīng)地增加,只是Müller細(xì)胞內(nèi)對(duì)谷氨酸的轉(zhuǎn)化能力逐漸增強(qiáng);到視網(wǎng)膜變性晚期,谷氨酸的釋放量相對(duì)減少。
　　3.正常大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞鉗制在-80mV水平

4、下受光刺激后誘發(fā)的內(nèi)向電流包括三種成份,即AMPA受體成份,GABA受體成份,誘發(fā)動(dòng)作電位后產(chǎn)生的Na+內(nèi)流成份;在此鉗制電壓下,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞主要通過AMPA受體和GABA受體接受上級(jí)神經(jīng)元的輸入;并且內(nèi)向電流強(qiáng)度隨年齡增加無明顯改變,穩(wěn)定在一定水平,且谷氨酸電流強(qiáng)度也無明顯改變;NBQX不影響視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞內(nèi)向電流的各時(shí)程。
　　4.RCS大鼠視網(wǎng)膜中存活的對(duì)光刺激無反應(yīng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞仍保留了部分電生理功能;在視網(wǎng)膜變

5、性早期,部分視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞出現(xiàn)了功能障礙,光刺激信號(hào)不能通過上級(jí)神經(jīng)元傳遞到視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞;到視網(wǎng)膜變性晚期,存活的所有類型的視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞皆接受不到上級(jí)神經(jīng)元的信號(hào)輸入。
　　5.RCS大鼠視網(wǎng)膜變性早期時(shí)就導(dǎo)致ON型視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞接受的視網(wǎng)膜內(nèi)信息延遲、接受并處理信息的能力下降、視網(wǎng)膜信息輸出時(shí)間延遲,但對(duì)OFF型和ON-OFF型視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞無影響。但是,隨著視網(wǎng)膜變性的發(fā)展,各類型節(jié)細(xì)胞視網(wǎng)膜內(nèi)信息傳遞逐漸完全中斷,到晚期無

6、視網(wǎng)膜信號(hào)輸出。
　　6.RCS大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞接受和處理的信息量較正常大鼠明顯減少了,且這些信息主要是由視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞突觸后興奮性電流所介導(dǎo)的。
　　結(jié)論：
　　1.RCS大鼠視網(wǎng)膜變性晚期仍有大量?jī)?nèi)核層和節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞殘留,為光感受器移植、植入視覺假體等治療方式恢復(fù)變性視網(wǎng)膜的視功能提供了實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)。
　　2.RCS大鼠視網(wǎng)膜變性中期游離的谷氨酸可能發(fā)生蓄積,到視網(wǎng)膜變性晚期神經(jīng)視網(wǎng)膜減少了對(duì)下級(jí)神經(jīng)