三七總皂苷對視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞谷氨酸興奮毒性的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　觀察三七總皂苷（total panax notoginseng saponins， tPNS）對谷氨酸（glutamate，Glu）所致的視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞興奮毒性的保護(hù)作用，并初步探討其作用機制，從而為其用于青光眼的治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞系 RGC-5，根據(jù)分組給予不同的處理。其中空白對照組加入等量培養(yǎng)基，Glu興奮模型組加入1mM Glu刺激24h，陽性對照組在模型組的基礎(chǔ)上

2、加入10μM MK-801，觀察組在 Glu基礎(chǔ)上加入100～500μg/ml tPNS。24h后，通過鈣黃綠素-乙酰甲酯染色法觀察RGC-5的活性改變情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測RGC-5細(xì)胞凋亡。同時，采用RT-PCR檢測細(xì)胞處理后Thy-1的表達(dá)情況，激光共聚焦法檢測細(xì)胞內(nèi)Ca2+的水平，Western blot檢測caspase-3表達(dá)，硝酸還原酶法檢測一氧化氮(nitric oxide，NO)的產(chǎn)生情況。
　　結(jié)果：
　　

3、1. Calcein-AM染色結(jié)果顯示， Glu作用RGC-5細(xì)胞24h后，使其活細(xì)胞數(shù)明顯降低（P<0.01），而同時加入100～500μg/ml tPNS共孵育，能以劑量依賴性方式增加活細(xì)胞數(shù)。當(dāng)tPNS濃度為500μg/ml時，RGC-5活細(xì)胞數(shù)比Glu組增加了112.3％；
　　2. RT-PCR結(jié)果顯示，Glu處理能使Thy-1 mRNA水平降低。tPNS和MK-801干預(yù)后，Thy-1的mRNA表達(dá)水平較Glu組明顯上

4、調(diào)，且tPNS和Thy-1的表達(dá)呈一定的劑量依賴性；
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，Glu能明顯誘導(dǎo) RGC-5細(xì)胞，100～500μg/ml tPNS以及 MK-801干預(yù)后凋亡細(xì)胞減少，呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系；
　　4.正常對照組幾乎未檢測到 caspase-3的活性亞基（17-kDa），Glu處理后，17-kDa活性亞基明顯增多。不同濃度tPNS處理后，caspase-3活性亞基量顯著降低；
　　

5、5. RGC-5細(xì)胞經(jīng)Glu處理24h后，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度顯著增高。當(dāng)給予tPNS處理后，胞內(nèi)Ca2+濃度隨著tPNS劑量的增高而降低；
　　6. Glu組NO含量明顯高于陰性對照組(P＜0.01)；tPNS處理后，NO含量隨劑量的增加而降低。當(dāng)tPNS濃度為500μg/ml時，NO含量達(dá)（0.9241±0.025）μM，與Glu組相比， P<0.05。
　　結(jié)論：
　　1．tPNS有效保護(hù)Glu興奮所致的細(xì)胞凋亡；