8-羥基喹啉及其類似物抑制體外H460細(xì)胞增殖的機(jī)理研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文8羥基喹啉及其類似物抑制體外H460細(xì)胞增殖的機(jī)理研究姓名：祁銘華申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：藥物化學(xué)指導(dǎo)教師：閆兵20090407山東大’≯博士學(xué)位淪文件下H460細(xì)胞中Cu2的含量，運(yùn)用紫外光譜滴定法測定ox—Cu2和CQCu2在體外細(xì)胞環(huán)境中的結(jié)合常數(shù)Kbl和Kbz。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這兩種有機(jī)配體本身具有抑制H460細(xì)胞生長的活性，且Ox的活性比CQ的活性強(qiáng)，內(nèi)源銅的介入可以促進(jìn)有機(jī)配體對H460細(xì)胞的生長抑制作用。通過測

2、定細(xì)胞中Cu2含量，發(fā)現(xiàn)有機(jī)配體CQ、Ox能促使細(xì)胞中Cu2含量的升高，利用光譜分析測得Ox、CQ能有效的結(jié)合Cu2，0xCu2的結(jié)合常數(shù)Kbl比CQ—Cu2結(jié)合常數(shù)Kb2大。第二部分，我們研究了70個(gè)Ox類似物對H460細(xì)胞的毒性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)Ox及其CQ的8位一OH被其它取代基取代后對H460細(xì)胞沒有毒性，Ox類似物的抗腫瘤活性依賴于Cu2，內(nèi)源性Cu2存在時(shí)17個(gè)Ox類似物表現(xiàn)出抗腫瘤活性。通過比較17個(gè)抗腫瘤活性依賴于銅的Ox類似

3、物的IC50，發(fā)現(xiàn)類似物1#、5#、6#和115#對癌細(xì)胞生長的抑制作用較強(qiáng)，但是比Ox、CQ弱。利用紫外光譜分析這些化合物與cu2的結(jié)合作用，發(fā)現(xiàn)Ox類似物與cu2不結(jié)合。第三部分，通過進(jìn)一步研究Ox、CQ及其17個(gè)有活性的化合物對H460細(xì)胞的生長抑制作用，發(fā)現(xiàn)17個(gè)化合物在內(nèi)源性銅的介入下對H460細(xì)胞的生長抑制作用增強(qiáng)。著重研究115#、CQ、Ox對細(xì)胞中cu2含量的影響，發(fā)現(xiàn)Ox及其類似物能促使細(xì)胞內(nèi)銅含量的升高，其中Ox把C

4、u2帶入細(xì)胞內(nèi)的量比CQ帶入的多；而類似物115#帶入Cu2的量較少。另外我們測定了有無內(nèi)源性銅的條件下，H460細(xì)胞中ROS的水平變化，發(fā)現(xiàn)加入Ox、CQ、及其有活性的17個(gè)化合物都能促使H460細(xì)胞中ROS含量的升高，但是通過比較發(fā)現(xiàn)ROS含量的升高不是化合物抑制H460細(xì)胞增殖的主要原因。第四部分，運(yùn)用HPLC／MS／UV檢測器，對用于生物活性篩選的50個(gè)不同結(jié)構(gòu)的化合物進(jìn)行絕對定量，發(fā)現(xiàn)HPLC／MS／UV檢測器絕對定量對用于生