ErbB3在腎癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 ErbB3在腎細(xì)胞癌及其相應(yīng)的癌旁組織中的mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)的研究
　　目的：
　　1、研究ErbB3mRNA及蛋白在腎癌及其相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)情況;
　　2、探討ErbB3表達(dá)與腎癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1、分別應(yīng)用普通RT-PCR和實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測ErbB3mRNA在38例新鮮腎癌及其癌旁相應(yīng)的腎組織的表達(dá)情況;用

2、Western Blotting檢測ErbB3蛋白在38例腎癌組織及其相應(yīng)的癌旁腎組織中的表達(dá)情況。
　　2、統(tǒng)計(jì)分析ErbB3mRNA和蛋白在38例腎癌及相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)情況，同時(shí)探討25例腎癌及相應(yīng)癌旁組織中ErbB3的表達(dá)與腎癌TNM分期的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　普通RT-PCR及實(shí)時(shí)定量RT-PCR均顯示：17例腎癌組織較其相應(yīng)癌旁組織ErbB3mRNA明顯高表達(dá)，高表達(dá)率為44.74％（17/38），而有

3、6例癌旁組織較癌組織Erb B3mRNA高表達(dá)，其相應(yīng)高表達(dá)率為15.79%（6/38），余15例腎癌組織及癌旁組織ErbB3mRNA表達(dá)差異不明顯，占39.47%（15/38）；Western Blotting分析顯示：在38例配對(duì)的腎癌及癌旁組織中，其ErbB3表達(dá)情況與普通RT-PCR及實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果一致，其在PCR中ErbB3高表達(dá)的腎癌組織在Western Blotting檢測中也同樣高表達(dá)，且ErbB3在腫瘤組織中

4、的表達(dá)明顯高于癌旁組織；而25例腎癌及癌旁組織中ErbB3的表達(dá)與腎癌的TNM分期無明顯相關(guān)性（P=0.379＞0.05；r=0.184）。
　　結(jié)論：
　　Erb B3在腎癌組織較癌旁組織中高表達(dá)，提示ErbB3高表達(dá)可能與腎癌的發(fā)生密切相關(guān)，而與腎癌的TNM分期關(guān)系不明顯。
　　第二部分 慢病毒介導(dǎo)ErbB3基因過表達(dá)對(duì)A498細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究
　　目的：
　　觀察慢病毒載體介導(dǎo)的ErbB3基因

5、過表達(dá)對(duì)A498細(xì)胞生物特性的影響。
　　方法：
　　1、HEK293T的培養(yǎng)使用含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基；A498細(xì)胞的培養(yǎng)使用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，置于5%CO2、37℃的飽和濕度的溫箱中培養(yǎng)；
　　2、實(shí)驗(yàn)分兩組：pLEX-ErbB3慢病毒載體組及對(duì)照病毒載體（p LEX MCS）組；在聚乙烯亞胺（PEI）的介導(dǎo)下，分別與相應(yīng)包裝質(zhì)粒psPAX2、pM D2.G共轉(zhuǎn)染HEK29

6、3T細(xì)胞來包裝病毒；
　　3、將上述兩組適量病毒分別稀釋入含Polybrene(終濃度8μg/mL)的常規(guī)培養(yǎng)基，感染A498細(xì)胞24小時(shí)后，用1ug/ml的嘌呤霉素培養(yǎng)基篩選24小時(shí)，普通RT-PCR及實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測ErbB3mRNA在pLEX-ErbB3慢病毒載體組及對(duì)照病毒載體組A498細(xì)胞中的表達(dá)情況;用Western Blotting檢測ErbB3蛋白在pLEX-ErbB3慢病毒載體組及對(duì)照病毒載體組A498細(xì)

7、胞中的表達(dá)情況，并比較分析；
　　4、取經(jīng)嘌呤霉素篩選24小時(shí)后的兩組A498細(xì)胞接種于96孔板，在第3、4、5、6、7、8、9天分別以MTS法計(jì)算活細(xì)胞數(shù)量，并繪制生長曲線，比較兩組細(xì)胞生長情況；
　　5、用MTS法檢測經(jīng)病毒感染后的兩組A498細(xì)胞在不同順鉑濃度下的存活情況，繪制存活曲線并比較分析。
　　6、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果行t-test統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　經(jīng)普通RT-PCR及實(shí)時(shí)定量R

8、T-PCR檢測發(fā)現(xiàn)pLEX-Erb B3慢病毒載體組細(xì)胞較對(duì)照病毒載體組細(xì)胞ErbB3mRNA明顯高表達(dá)，說明PLEX-ErbB3慢病毒載體成功介導(dǎo)ErbB3基因在A498細(xì)胞中的高表達(dá)；Western Blotting結(jié)果也顯示經(jīng)pLEX-ErbB3慢病毒感染的A498細(xì)胞ErbB3蛋白同樣高表達(dá)；經(jīng)MTS結(jié)果顯示pLEX-Erb B3慢病毒載體組細(xì)胞組較對(duì)照病毒載體組細(xì)胞明顯增長更快；pLEX-ErbB3慢病毒載體組細(xì)胞組較對(duì)照病毒