大蒜素對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用及機制研究.pdf

1、目的：通過兩種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎常用模型一-佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvantarthritis，AA)模型與膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen-induced arthritis，CIA)模型，研究大蒜素對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Neumatoid arthritis，RA)的作用，并對其作用機制進(jìn)行探討。 方法：大鼠右后足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1 ml致炎，建立大鼠 AA 模型。檢測各組大鼠致炎后體重變化及足爪腫脹度，并對其關(guān)節(jié)炎癥進(jìn)行

2、評分，石蠟切片 HE 染色對關(guān)節(jié)組織作病理檢查，MTT 法檢測脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，免疫印跡法檢測關(guān)節(jié)軟組織中環(huán)加氧酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)和誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(induced-nitricoxide synthase，iNOS)蛋白的表達(dá)，EIA 法測定關(guān)節(jié)軟組織中前列腺素E<,2>(Prostaglandin E<,2>，PGE<,2>)水平，NO試劑盒檢測關(guān)節(jié)軟組織中NO的含量。 CⅡ膠原200

3、μl溶于100μl 0.05M 醋酸中，并與等體積(100μl)弗氏完全佐劑充分混合后，注射于DBA/1J小鼠尾根部皮下。初次致敏后第21 d，再次小鼠尾根部皮下注射相同體積試劑給予免疫激發(fā)，建立小鼠CIA模型。在成功建立CIA模型的基礎(chǔ)上，檢測各組小鼠足爪炎癥的腫脹度，并對其關(guān)節(jié)炎癥進(jìn)行評分。對小鼠關(guān)節(jié)組織作病理檢查，MTT法檢測脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，免疫印跡法檢測關(guān)節(jié)軟組織中COX-2、iNOS蛋白的表達(dá)，EIA法測定關(guān)節(jié)軟組織中PG

4、E<,2>水平，NO試劑盒檢測關(guān)節(jié)軟組織中NO的含量。ELISA法檢測血清中炎性因子TNF-α、IL-6的表達(dá)。 結(jié)果：大蒜素(5、10、15 mg·kg<'-1>)腹腔注射給藥能劑量依賴性地減輕AA大鼠的關(guān)節(jié)炎癥，抑制AA大鼠Con A誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，下調(diào)AA大鼠踝關(guān)節(jié)軟組織中COX-2和iNOS蛋白的過高表達(dá)，并降低關(guān)節(jié)軟組織中PGE<,2>水平和NO含量。同時病理檢查發(fā)現(xiàn)大蒜素可抑制從小鼠滑膜增生，減輕炎性細(xì)胞浸

5、潤。大蒜素(10、20、30 mg·kg<'-1>)腹腔注射給藥劑量依賴性地減輕CIA小鼠的關(guān)節(jié)炎癥，抑制CIA小鼠CⅡ誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)及踝關(guān)節(jié)軟組織中COX-2、iNOS蛋白過高表達(dá)，降低關(guān)節(jié)軟組織中PGE<,2>水平和NO含量，降低血清中 TNF-α、IL-6的水平。同時病理檢查發(fā)現(xiàn)可改善局部關(guān)節(jié)炎癥狀況，抑制CIA小鼠關(guān)節(jié)腔狹窄、滑膜增生以及炎性細(xì)胞浸潤。 結(jié)論：大蒜素對大鼠AA和小鼠CIA具有一定的治療作用，其機