南瓜多糖的功能性質(zhì)及其降糖作用機(jī)制研究.pdf

1、南瓜屬于葫蘆科植物南瓜(Cucurbit moschata Duch.)的果實(shí),我國(guó)資源相當(dāng)豐富,中國(guó)古代就有對(duì)南瓜食療保健作用的記載,近年來(lái)關(guān)于南瓜多糖防治糖尿病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究較多,其防治糖尿病的作用機(jī)制研究不斷深入。但關(guān)于南瓜多糖進(jìn)入體內(nèi)的吸收分布規(guī)律還不清楚,其在胃腸道各個(gè)部位的降解代謝途徑也沒(méi)得出明確結(jié)論,尤其南瓜多糖改善氧化應(yīng)激損傷與降糖間的相關(guān)性還鮮有研究?；诖?本文以南瓜為原料,制備降血糖活性南瓜多糖,通過(guò)模擬

2、其在人工胃液中較真實(shí)的蠕動(dòng)變化情況,獲得南瓜多糖經(jīng)胃作用后的較真實(shí)信息;純化獲得降血糖南瓜多糖的均一組分,通過(guò)南瓜多糖熒光衍生物的制備及在生物樣品中定量分析方法的建立,探明南瓜多糖在小鼠體內(nèi)的吸收分布規(guī)律;通過(guò)多種途徑探討南瓜多糖的降糖作用機(jī)制;分析水不溶性南瓜多糖的功能性質(zhì)。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　1.采用水醇提取,Sevage法脫蛋白后獲得的水溶性南瓜粗多糖(PP),通過(guò)四氧嘧啶糖尿病小鼠模型驗(yàn)證其降血糖作用,通過(guò)模擬PP在體

3、外人工胃蠕動(dòng)模型中的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程,發(fā)現(xiàn)PP在體外模擬人工胃條件下隨時(shí)間作用會(huì)發(fā)生一定程度的降解,產(chǎn)生還原糖和寡糖片段,水解產(chǎn)物仍具有顯著的降糖效果,且作用150min后的水解產(chǎn)物其降糖效果優(yōu)于30min。
　　2.制備不同顆粒度的水不溶性南瓜多糖(IDF),通過(guò)結(jié)合水力、吸附性能(包括持油性、膽酸鹽、膽固醇、亞硝酸根離子吸附能力)、陽(yáng)離子交換能力的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)IDF的結(jié)合水力隨粒徑減小出現(xiàn)先增大后下降的趨勢(shì),細(xì)粉時(shí)結(jié)合能力最大,存在

4、顯著性差異(P<0.05);IDF結(jié)合膽酸鈉的能力亦隨粒徑減小出現(xiàn)先增大后下降的趨勢(shì),但各粒徑間不存在顯著性差異(P>0.05);IDF吸附膽固醇的能力隨粒徑減小變化不大(P>0.05),但各粒徑下南瓜IDF在pH2時(shí)對(duì)膽固醇的吸附量均顯著大于pH7時(shí)的吸附能力(P<0.05);IDF的持油力、吸附NO2-的能力與陽(yáng)離子交換能力均隨粒徑減小出現(xiàn)下降的趨勢(shì),粗粉時(shí)效果最明顯。
　　3.采用不同濃度酒精對(duì)南瓜粗多糖(PP)分級(jí)獲得四種

5、組分(PP-a,-b,-c,-d),對(duì)分離過(guò)程中的每種組分的降糖效果與得率進(jìn)行分析,得率高且降糖顯著的組分PP-c通過(guò)凝膠柱分離純化獲得分子量不同的兩種組分(PP-e,-f),其中PP-e的降血糖效果顯著且持久,PP-e的分子量為4630Da,主要是以鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖為結(jié)構(gòu)單元的糖類物質(zhì),摩爾比為1.12:5.19:1.00:3.91。
　　4.利用熒光胺標(biāo)記南瓜多糖獲得PP-e-flu,建立了PP-e-flu在生

6、物樣品中的定量分析方法,通過(guò)灌胃與腹腔注射兩種給藥途徑追蹤其在小鼠胃腸道內(nèi)及組織器官中的分布變化規(guī)律。結(jié)果,采用灌胃的給藥方式,PP-e-flu在小鼠體內(nèi)的主要吸收部位是小腸的空腸與回腸,吸收時(shí)間主要集中在1h至6h。灌胃30min時(shí)在肝臟中檢出PP-e-flu,隨后含量不斷上升,到24h時(shí)PP-e-flu含量達(dá)到最高值。灌胃6h時(shí)在脾臟與胰臟檢出PP-e-flu,隨后含量不斷上升,到24h時(shí)PP-e-flu含量達(dá)到最高值。采用腹腔注射

7、的給藥方式,60min時(shí)在消化道胃、小腸(十二指腸、空腸、回腸)與大腸(盲腸、結(jié)腸)各部位均檢測(cè)出PP-e-flu,隨后出現(xiàn)緩慢上升趨勢(shì),6h時(shí)出現(xiàn)峰值,其中空腸中PP-e-flu含量最高,是胃腸道其它各部位的兩倍以上,隨后胃腸道各部位PP-e-flu含量不斷下降,從12h到24h時(shí)趨于平穩(wěn)。在肝臟中始終未檢測(cè)出PP-e-flu。在脾臟中30min時(shí)檢出PP-e-flu,隨后緩慢上升至60min時(shí)出現(xiàn)峰值,隨后緩慢下降至12h以后為零。

8、在胰臟中30min時(shí)檢出PP-e-flu,隨后至12h一直不斷上升達(dá)最高值,持續(xù)至24h一直維持最高值。
　　5.通過(guò)南瓜多糖對(duì)不同實(shí)驗(yàn)性高血糖模型小鼠血糖的影響,南瓜多糖對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠胰島與肝組織細(xì)胞的影響,南瓜多糖的體外與體內(nèi)抗氧化活性等多種途徑,探討南瓜多糖可能的降糖作用機(jī)制。結(jié)果,南瓜多糖對(duì)四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的血糖升高有顯著的抑制作用(P<0.01),并能夠降低腎上腺素模型小鼠的高血糖(P<0.01),降低地塞米