南瓜多糖的功能性質(zhì)及其降糖作用機(jī)制研究.pdf

1、南瓜屬于葫蘆科植物南瓜(Cucurbit moschata Duch.)的果實,我國資源相當(dāng)豐富,中國古代就有對南瓜食療保健作用的記載,近年來關(guān)于南瓜多糖防治糖尿病的動物實驗研究和臨床研究較多,其防治糖尿病的作用機(jī)制研究不斷深入。但關(guān)于南瓜多糖進(jìn)入體內(nèi)的吸收分布規(guī)律還不清楚,其在胃腸道各個部位的降解代謝途徑也沒得出明確結(jié)論,尤其南瓜多糖改善氧化應(yīng)激損傷與降糖間的相關(guān)性還鮮有研究。基于此,本文以南瓜為原料,制備降血糖活性南瓜多糖,通過模擬

2、其在人工胃液中較真實的蠕動變化情況,獲得南瓜多糖經(jīng)胃作用后的較真實信息;純化獲得降血糖南瓜多糖的均一組分,通過南瓜多糖熒光衍生物的制備及在生物樣品中定量分析方法的建立,探明南瓜多糖在小鼠體內(nèi)的吸收分布規(guī)律;通過多種途徑探討南瓜多糖的降糖作用機(jī)制;分析水不溶性南瓜多糖的功能性質(zhì)。主要研究內(nèi)容如下:
　　1.采用水醇提取,Sevage法脫蛋白后獲得的水溶性南瓜粗多糖(PP),通過四氧嘧啶糖尿病小鼠模型驗證其降血糖作用,通過模擬PP在體

3、外人工胃蠕動模型中的動態(tài)變化過程,發(fā)現(xiàn)PP在體外模擬人工胃條件下隨時間作用會發(fā)生一定程度的降解,產(chǎn)生還原糖和寡糖片段,水解產(chǎn)物仍具有顯著的降糖效果,且作用150min后的水解產(chǎn)物其降糖效果優(yōu)于30min。
　　2.制備不同顆粒度的水不溶性南瓜多糖(IDF),通過結(jié)合水力、吸附性能(包括持油性、膽酸鹽、膽固醇、亞硝酸根離子吸附能力)、陽離子交換能力的測定,發(fā)現(xiàn)IDF的結(jié)合水力隨粒徑減小出現(xiàn)先增大后下降的趨勢,細(xì)粉時結(jié)合能力最大,存在

4、顯著性差異(P<0.05);IDF結(jié)合膽酸鈉的能力亦隨粒徑減小出現(xiàn)先增大后下降的趨勢,但各粒徑間不存在顯著性差異(P>0.05);IDF吸附膽固醇的能力隨粒徑減小變化不大(P>0.05),但各粒徑下南瓜IDF在pH2時對膽固醇的吸附量均顯著大于pH7時的吸附能力(P<0.05);IDF的持油力、吸附NO2-的能力與陽離子交換能力均隨粒徑減小出現(xiàn)下降的趨勢,粗粉時效果最明顯。
　　3.采用不同濃度酒精對南瓜粗多糖(PP)分級獲得四種

5、組分(PP-a,-b,-c,-d),對分離過程中的每種組分的降糖效果與得率進(jìn)行分析,得率高且降糖顯著的組分PP-c通過凝膠柱分離純化獲得分子量不同的兩種組分(PP-e,-f),其中PP-e的降血糖效果顯著且持久,PP-e的分子量為4630Da,主要是以鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖為結(jié)構(gòu)單元的糖類物質(zhì),摩爾比為1.12:5.19:1.00:3.91。
　　4.利用熒光胺標(biāo)記南瓜多糖獲得PP-e-flu,建立了PP-e-flu在生

6、物樣品中的定量分析方法,通過灌胃與腹腔注射兩種給藥途徑追蹤其在小鼠胃腸道內(nèi)及組織器官中的分布變化規(guī)律。結(jié)果,采用灌胃的給藥方式,PP-e-flu在小鼠體內(nèi)的主要吸收部位是小腸的空腸與回腸,吸收時間主要集中在1h至6h。灌胃30min時在肝臟中檢出PP-e-flu,隨后含量不斷上升,到24h時PP-e-flu含量達(dá)到最高值。灌胃6h時在脾臟與胰臟檢出PP-e-flu,隨后含量不斷上升,到24h時PP-e-flu含量達(dá)到最高值。采用腹腔注射

7、的給藥方式,60min時在消化道胃、小腸(十二指腸、空腸、回腸)與大腸(盲腸、結(jié)腸)各部位均檢測出PP-e-flu,隨后出現(xiàn)緩慢上升趨勢,6h時出現(xiàn)峰值,其中空腸中PP-e-flu含量最高,是胃腸道其它各部位的兩倍以上,隨后胃腸道各部位PP-e-flu含量不斷下降,從12h到24h時趨于平穩(wěn)。在肝臟中始終未檢測出PP-e-flu。在脾臟中30min時檢出PP-e-flu,隨后緩慢上升至60min時出現(xiàn)峰值,隨后緩慢下降至12h以后為零。

8、在胰臟中30min時檢出PP-e-flu,隨后至12h一直不斷上升達(dá)最高值,持續(xù)至24h一直維持最高值。
　　5.通過南瓜多糖對不同實驗性高血糖模型小鼠血糖的影響,南瓜多糖對四氧嘧啶糖尿病小鼠胰島與肝組織細(xì)胞的影響,南瓜多糖的體外與體內(nèi)抗氧化活性等多種途徑,探討南瓜多糖可能的降糖作用機(jī)制。結(jié)果,南瓜多糖對四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的血糖升高有顯著的抑制作用(P<0.01),并能夠降低腎上腺素模型小鼠的高血糖(P<0.01),降低地塞米