基因和藥物共傳遞體系的制備與研究.pdf

1、本文以超支化聚乙烯亞胺(PEI)引發(fā)賴氨酸-N-內(nèi)羧酸酐(Lys-NCA)和谷氨酸-N-內(nèi)羧酸酐(Glu-NCA)單體開環(huán)聚合，得到具有pH響應(yīng)的電荷翻轉(zhuǎn)功能的聚乙烯亞胺-聚賴氨酸-聚谷氨酸無規(guī)共聚物(PELG)，該共聚物可以作為納米載體的遮蔽體系。利用烏頭酸酐(CA)對(duì)抗腫瘤藥物阿霉素(DOX)進(jìn)行修飾，得到酸敏感的小分子藥物烏頭酸酐-阿霉素(CAD)。通過核磁、凝膠滲透色譜、紅外光譜、質(zhì)譜對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)和分子量等一系列表征，證

2、實(shí)了目標(biāo)產(chǎn)物的成功合成。
　　通過靜電吸附制備了PELG/PEI/CAD載藥復(fù)合物體系。Zeta電位測(cè)試證實(shí)了體系具有pH響應(yīng)的電荷翻轉(zhuǎn)功能。藥物釋放實(shí)驗(yàn)證實(shí)體系具有酸敏感的藥物釋放性能。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)證實(shí)載體材料的生物安全性良好，且PELG/PEI/CAD對(duì)HeLa細(xì)胞具有非常高的殺傷力。細(xì)胞內(nèi)吞實(shí)驗(yàn)和共聚焦照片結(jié)果顯示，體系在pH6.8（類似腫瘤微酸環(huán)境）時(shí)能夠被腫瘤細(xì)胞高效內(nèi)吞，大量的藥物可被載體攜帶進(jìn)入細(xì)胞并分布于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)

3、胞核中。
　　由于早期的工作已經(jīng)驗(yàn)證了體系的載基因性能，所以本文中進(jìn)一步主要研究基因和藥物共傳遞體系PELG/PEI/(DNA+CAD)。Zeta電位測(cè)試證實(shí)了共傳遞體系具有pH響應(yīng)的電荷翻轉(zhuǎn)功能。DNA凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)證明體系具有良好的DNA結(jié)合能力。藥物釋放實(shí)驗(yàn)證實(shí)該共傳遞體系具有酸敏感的藥物釋放功能。利用PELG/PEI/DNA對(duì)HepG2細(xì)胞進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)染，體系展現(xiàn)出良好的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，并確定了最佳轉(zhuǎn)染質(zhì)量比;PELG/PEI

4、/(DNA+CAD)共傳遞體系中，載入不同濃度的CAD對(duì)DNA的轉(zhuǎn)染影響并不大，并確定了體系擔(dān)載DNA和CAD的質(zhì)量比。進(jìn)一步利用p53基因作為治療基因，制備PELG/PEI/(p53+CAD)基因和藥物共傳遞體系。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示共傳遞體系的半數(shù)抑制濃度(IC50)均低于單獨(dú)的載基因或載藥體系，即共傳遞體系對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力最大。激光共聚焦照片證實(shí)基因和藥物能被載體共同攜帶到腫瘤細(xì)胞中，且在pH6.8條件下，腫瘤細(xì)胞對(duì)體系復(fù)合物的內(nèi)吞