純化內(nèi)耳P0蛋白與聽(tīng)神經(jīng)病相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文純化內(nèi)耳P0蛋白與聽(tīng)神經(jīng)病相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究姓名：李海英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：張榕;林熹20090501S t u d y o n c o r r e l a t i o nb e t w e e n P O p r o t e i np u r i f i e df r o m i n n e r e a ra n da u d i t o r y n e u r o p a t h yA

2、 b r t r a c tO b j e c t i v e ：T o p 嘶鳥(niǎo)P Op r o t e i n f r o m g u i n e a p i g s ’i n n e r e a r s b y p r e p a r a t i v eS D S - P A G E a n d t o s t u d y t h ec o r r e l a t i o n b e t w e e nP 0 p r o t e

3、i na n d a u d i t o r yn e u r o p a t h y ．M e t h o d ：Am i x t u r e o fm e m b r a n e o u s p r o t e i n s o f i n n e re a r w a ss e p a r e t e d b yp r e p a r a t i v e S D S - P A G E ．T h e c o r r e s p o

4、n d i n gb a n da t 3 0 0 0 0w a s c u t a n de l e c t r a l l ye l u t e d ．T h e p r o t e i nc o l l e c t e dw a s i d e n t i f i e db yW e s t e r n b l o ta s s a y ． A g r o u p o f 2 0h e a l t h yS p r a g u e

5、 - D a w l e yr a t sw e r ei m m u n i z e d 、^ ，i t l lP 0p r o t e i ne m u l s i f i e di nc o m p l e t eF r e u n d ’Sa d j u v a n t ，a n o t h e r2 0 S p r a g u e —D a w l e y r a t sw e r ei m m u n i z e d 、析t

6、 1 1c o m p l e t eF r e u n d s a d j u v a n t o n l ya sc o n t r 0 1 ．T h e r a t s ‘A B R t h r e s h o l d s ，s e r u mI g G l e v e la n dm o r p h o l o g i c a lc h a n g e si nt h ec o c h l e a rn e r v e w e

7、r ei n v e r s t i g a t e d ．T h ed i s t r i b u t i o no fP O p r o t e i n i n t h e c o c h l e a r n e r v e w a s d e t e c t e d b y i m m u n o h i s t o c h e m i c a lt e c h n i q u e ．R e s u l t ：T h e p u

8、r i t yo f t h ep r o t e i nW a s d e m o n s t r a t e db y a s i n g l eb a n d a tt h e3 0 0 0 0s i t e i n S D S - P A G E ，w h i c h w a si d e n t i f i e d a sP Op r o t e i nb yW e s t e r nB l o ta n a l y s i

9、sa s s a y ．T e ne a r so f t h e r a t si m m u n i z e d 、析m p u r i f i e dP 0 p r o t e i n a n d o n e e a r o ft h ec o n t r o lg r o u p d e v e l o p e d h e a r i n gl o s s ( > 1 5 d B ) ．I n t h eA B R s t

10、 u d y ，a b o u t2 9 ．4 ％P 0 - i m m u n i z e d r a t ss h o w e di n c r e a s e dh e a r i n gt h r e s h o l d s ．T h et h r e s h o l do fw a v eI I Ie l e v a t e ds i g n i f i c a n ti n t h i s g r o u po fr a t

11、 sc o m p a r e dw i t ht h e c o n t r o l ( 尸< 0 ．0 5 ) ．N os i g n i f i c a n t c h a n g e o f D P O A E W a s f o u n d i n t h e P 0 s e n s i t i z e d r a t s w h e nc o m p a r e dt oc o n t r o l s ．I nt h

12、es t u d yo fI g Gl e v e l ，c o m p a r e d 晰t l lc o n t r o lg r o u p ，I g Gl e v e lo f P O - i m m u n i z e dr a t s ’s e r u me l e v a t e ds i g n i f i c a n t ( P < 0 ．0 5 ) ．T h ed e m y e l i n a t i o n

13、 o fc o c h l e a r n e r v e w a s o b s e r v e d b y e l e c t r o n m i c r o s c o p e a l t h o u g h t h e r e W a s n os i g n i f i c a n ta b n o r m a l i t y u n d e r l i g h t m i c r o s c o p e ．P O p r o

14、 t e i n i sd i s t r i b u t e d i nt h em y e l i ns h e a t h o f c o c h l e a rn e r v e ．C o n c l u s i o n ：P Op r o t e i nf r o mg u i n e ap i g si n n e re a rc a r l b e s u c c e s s f u l l y p u r i f i e

15、 db y p r e p a r a t i v e S D S —P A G Ea n da n a n i m a lm o d e lo fd e m y e l i n a t i o ni n d u c e db y P 0p r o t e i nw a ss u c c e s s f u l l y e s t a b l i s h e d , w h i c hi s v e r yu s e f u l l f