轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3聯(lián)合骨形態(tài)發(fā)生蛋白2雙基因誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞的分化.pdf

1、目的:探討慢病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(transforming growthfactorβ3，TGF-β3)聯(lián)合骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)在誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrowderived mesenchymal stem cells，BMSC)向成骨細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中的可能性及相互作用機(jī)制。
　　 方法:1.構(gòu)建慢病毒:構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白、tgfβ3和BM

2、P-2基因的重組慢病毒載體，包裝、生產(chǎn)重組后的慢病毒(Lv-GFP、Lv-tgfβ3-GFP、Lv-BMP2-GFP、Lv-BMP2-tgfβ3-GFP);2.原代細(xì)胞培養(yǎng):取幼兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)、傳代，至第三代用于實(shí)驗(yàn);3.轉(zhuǎn)染與檢測(cè):將包裝后的重組慢病毒按所攜帶的不同基因分四組轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，繼續(xù)體外培養(yǎng)，于轉(zhuǎn)染后1周分別提取各細(xì)胞的總RNA和蛋白，分別采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)、免疫印跡法檢測(cè)各組中目的

3、基因和相應(yīng)蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:通過(guò)重組慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，可以將目的基因tgfβ3和BMP-2同時(shí)整合入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)，并實(shí)現(xiàn)了雙基因的穩(wěn)定表達(dá)。成功轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中基因tgfβ3和BMP-2在核酸及蛋白水平均明顯高于單基因轉(zhuǎn)染組及空白對(duì)照組(P＜0.05)，提示tgfβ3聯(lián)合BMP-2有更高的誘導(dǎo)BMSC向成骨表型轉(zhuǎn)化的潛能，且兩者之間具有協(xié)同作用。
　　 結(jié)論:通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)將tgfβ3和BMP