色素上皮衍生因子與急性冠脈綜合征的相關(guān)性研究及其在動(dòng)脈粥樣硬化中的表達(dá)調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的:色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor, PEDF)具有抗炎、抗氧化、抗血栓形成、抑制血管新生、抗腫瘤、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)及神經(jīng)保護(hù)等特性,但在冠心病中的表達(dá)情況及其機(jī)制目前尚不明確。本研究目的是臨床觀察PEDF在急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)的表達(dá)及對(duì)近期預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值;體外實(shí)驗(yàn)觀察 PEDF在氧化低密度脂蛋白( oxidized low densi

2、ty lipoprotein, ox-LDL)致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)損傷后的表達(dá),探討載脂蛋白A-Ⅰ模擬肽D-4F對(duì)PEDF的表達(dá)調(diào)控作用。
　　方法:1、臨床研究:入選我院心內(nèi)科ACS患者200例,年齡性別匹配的對(duì)照160例,ELISA法檢測(cè)兩組人群血漿PEDF濃度,比較其水平差異,Logistic回歸分析PEDF與ACS相關(guān)性。隨訪AC

3、S患者,觀察近期主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events, MACE)發(fā)生情況,Kaplan-Meier生存曲線分析PEDF水平與ACS近期預(yù)后的關(guān)系。2、機(jī)制研究:①體外不同濃度ox-LDL(6.25,12.5,25,50,100,150mg/L)刺激 HUVECs24h,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)ROS水平,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性,Western blot和RT-PCR分別測(cè)定

4、PEDF蛋白及mRNA表達(dá)水平,Pearson相關(guān)分析PEDF表達(dá)水平與ROS含量的關(guān)系。②體外不同濃度D-4F(12.5,25,50 mg/L)預(yù)處理HUVECs2h后,再用100mg/L ox-LDL刺激細(xì)胞24h,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)ROS水平,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性,相應(yīng)試劑盒測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液LDH、NO水平及細(xì)胞內(nèi)MDA、SOD濃度,Western blot和RT-PCR分別測(cè)定PEDF蛋白及mRNA表達(dá)水平。③體

5、外預(yù)先用PEDF-siRNA沉默HUVECs中PEDF基因表達(dá),再予以50mg/L D-4F預(yù)處理細(xì)胞2 h,最后用100mg/L ox-LDL刺激24h,Western blot和RT-PCR測(cè)定細(xì)胞內(nèi)PEDF蛋白及mRNA表達(dá)是否被成功抑制,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi) ROS水平,相應(yīng)試劑盒測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液LDH、NO水平及細(xì)胞內(nèi)MDA、SOD濃度。
　　結(jié)果:1、ACS組與對(duì)照組血漿PEDF濃度分別為(7.36±2.

6、12)μ g/ml和(8.44±2.13)μ g/ml,差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001);Logistic回歸分析顯示PEDF是 ACS獨(dú)立保護(hù)因素(OR=0.76,95％CI0.623~0.935,P=0.01)。ACS患者隨訪6個(gè)月(平均5.6±1.4個(gè)月)后,MACE共發(fā)生22例,MACE組PEDF水平(6.05±2.18)μg/ml,無(wú) MACE組為(7.52±2.07)μg/ml,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.031);

7、根據(jù)PEDF水平將ACS分為高水平(H)組與低水平(L)組兩個(gè)亞組,H組(114例)MACE發(fā)生10例,L組(86例)MACE發(fā)生12例,且4例心源性死亡均發(fā)生在 L組,但Kaplan-Meier生成曲線分析兩組差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.477)。2、ox-LDL濃度為25mg/L時(shí)HUVECs凋亡明顯增多(P<0.05),細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯升高(P<0.01),而細(xì)胞活性在12.5mg/L ox-LDL組已表現(xiàn)為顯著下降(P<0

8、.05)。Western blot和RT-PCR結(jié)果示ox-LDL呈濃度依賴性誘導(dǎo)HUVECs中PEDF蛋白及mRNA表達(dá)降低(P<0.05),與細(xì)胞內(nèi) ROS含量呈線性負(fù)相關(guān)(r=-0.121,95%CI-0.156~-0.087;r=-0.319,95%CI-0.398~-0.239)。3、D-4F預(yù)處理細(xì)胞后再以ox-LDL刺激24h,結(jié)果顯示,與單純100mg/L ox-LDL處理組比較,25mg/L D-4F組與50mg/L

9、D-4F組顯著降低細(xì)胞凋亡率(P<0.01),增加細(xì)胞活性(P<0.01),減少細(xì)胞損傷時(shí)LDH釋放(P<0.01),降低細(xì)胞內(nèi)ROS與MDA水平(P<0.05),提高SOD及NO水平(P<0.05),增加PEDF蛋白及mRNA表達(dá)水平(P<0.01)。4、轉(zhuǎn)染PEDF-siRNA可抑制細(xì)胞內(nèi) PEDF蛋白及 mRNA表達(dá)(P<0.01),模型建立成功。各干預(yù)措施結(jié)束后,結(jié)果顯示:與D-4F組比較,PEDF-siRNA組細(xì)胞凋亡率、培養(yǎng)