汞-富T寡核苷酸和鎘配合物檢測金屬硫蛋白的新方法研究.pdf

1、金屬硫蛋白（Metallothioneins, MTs）具有重要的生物學(xué)功能，諸如清除自由基、重金屬解毒、抗電離輻射及抑制細胞凋亡等。此外，金屬硫蛋白還可作為環(huán)境中重金屬污染的生物標志物。因此，建立簡便、靈敏、快速、實用的金屬硫蛋白的檢測新方法不僅對于環(huán)境污染的監(jiān)測、評價，而且對于MTs生物學(xué)功能的研究都具有重要意義。
　　本文第二章建立了基于Hg-富T寡核苷酸和金納米比色法檢測MTs的新方法。在pH=8.0的B-R緩沖溶液中，H

2、g2+與富T寡核苷酸（TRO）形成T-Hg2+-T復(fù)合物，加入MTs后，MTs可與T-Hg2+-T復(fù)合物中的Hg2+結(jié)合，釋放出TRO，且吸附在AuNPs表面上，導(dǎo)致體系的顏色發(fā)生改變。據(jù)此建立了比色傳感測定MTs的新方法。在優(yōu)化的實驗條件下， MTs的濃度為2.56×10-8–3.39×10-7 mol·L-1時，體系的(A620/A520)與MTs濃度有良好的線性關(guān)系，且體系顏色發(fā)生由藍到紅變化，可用裸眼進行定量測定?；貧w方程為(A

3、620/A520)=0.092+0.242c(×10-7mol·L-1)，r=0.9841，檢出限為7.67×10-9 mol·L-1。該方法操作簡便、快速、靈敏、成本低，已成功應(yīng)用于尿樣中痕量MTs的測定。
　　本文第三章基于8-羥基喹啉-5-磺酸（HQS）-鎘配合物，建立了熒光猝滅法測定尿樣中MTs的新方法。實驗發(fā)現(xiàn)，在B-R緩沖溶液及陽離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化胺（CTMAB）存在時，鎘離子（Cd2+）與8-羥基喹啉-

4、5-磺酸形成HQS-Cd2+配合物，加入MTs后可使HQS-Cd2+配合物的熒光強度顯著減弱。據(jù)此建立了一種測定尿液中MTs的熒光猝滅新方法。在最佳的實驗條件下，體系的最大熒光峰位于524 nm。MTs的濃度在3.12×10-8–1.23×10-6 mol·L-1范圍內(nèi)與體系的熒光強度變化值呈良好線性關(guān)系，線性回歸方程為ΔF=12.79+20.20 c(×10-7 mol·L-1)，r2=0.9919，檢出限為9.36×10-9 mol

5、·L-1。該方法簡便快速，靈敏度高，選擇性好，用于尿樣中MTs的測定，結(jié)果滿意。
　　本文第四章研究了8-羥基喹啉-5-磺酸-鎘配合物與金屬硫蛋白的反應(yīng)機制。結(jié)果表明，HQS-Cd(II)配合物與MTs的相互作用主要由疏水作用力驅(qū)動，形成的HQS-Cd(Ⅱ)-MTs復(fù)合物中，HQS-Cd(Ⅱ)和MTs的結(jié)合比為11.9:1。依據(jù)Stern-Volmer方程和熒光壽命測定獲得的結(jié)果，推測 HQS-Cd(Ⅱ)配合物的熒光被MTs猝滅的