骨靈片對骨質(zhì)疏松大鼠腰椎體視學(xué)及生物力學(xué)的影響.pdf

1、研究背景： 骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，OP)是以骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)退行性改變和骨力學(xué)強(qiáng)度減弱，導(dǎo)致骨折發(fā)生的危險性增加為主要特征的一種全身代謝性骨骼疾病。中藥復(fù)方通過多靶點(diǎn)的整體調(diào)節(jié)，對骨質(zhì)疏松癥的治療具有優(yōu)勢。骨靈片(GuLingPian，GLP)是依據(jù)祖國醫(yī)學(xué)對骨質(zhì)疏松癥的認(rèn)識，以“滋腎陰，補(bǔ)腎陽”為大法，針對骨質(zhì)疏松癥“腎虛為主，多虛多瘀”的病機(jī)特點(diǎn)組方，具有補(bǔ)腎壯骨、活血通絡(luò)、陰陽雙補(bǔ)功用，應(yīng)用于臨床多年，對

2、骨質(zhì)疏松癥患者有良好確切療效。 本實(shí)驗(yàn)將通過觀察GLP對骨質(zhì)疏松大鼠模型的骨形態(tài)計量學(xué)、三維體視學(xué)以及生物力學(xué)改變，研究其對于骨強(qiáng)度的影響，并進(jìn)一步探討GLP治療骨質(zhì)疏松癥的機(jī)理，為臨床研究抗骨質(zhì)疏松藥物提供科學(xué)依據(jù)。 目的： 觀察GLP對骨質(zhì)疏松大鼠模型的骨形態(tài)計量學(xué)、三維體視學(xué)以及生物力學(xué)改變，研究其對于骨強(qiáng)度的影響，并進(jìn)一步探討GLP治療骨質(zhì)疏松癥的機(jī)理。 方法： 1.骨靈片液根據(jù)骨靈片處方

3、提取工藝提取有效成分，過濾濃縮為終濃度為1g生藥/ml，由南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中藥制劑室提供。 2.選用3月齡Sprague-Dawley(SD)系SPF級雌性大鼠36只，體重210-240g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究中心提供(檢測合格證號1802208)。預(yù)先對試驗(yàn)動物進(jìn)行編號：1，2,3，……34，35，36。通過查看隨機(jī)數(shù)字表的方法，單盲隨機(jī)分為6組[1]。分別為空白對照組(即假手術(shù)組，A組)、去卵巢組(B組)、骨靈片

4、低(C組)、中(D組)、高劑量組(E組)、雌激素對照組(F組)，每組各6只。分別給予生理鹽水、骨靈片高、中、低劑量、雌激素灌飼3個月。 3.采用去除卵巢的方法，建立雌性骨質(zhì)疏松大鼠模型。 4.術(shù)后正常飼養(yǎng)滿1月后開始給藥，給藥前稱量各組大鼠體重，根據(jù)體重?fù)Q算給藥劑量，各組大鼠均等體積給藥，空白對照組和模型組均予生理鹽水灌服，雌激素對照組給予30μg/Kg·d的17a-炔雌醇灌飼。骨靈片組以臨床等效劑量為準(zhǔn)，根據(jù)人鼠劑量換

5、算標(biāo)準(zhǔn)，以高(3.54g.kg-1.d-1)、中(2.66g.kg-1.d-1)、低(1.77g.kg-1.d-1)劑量，各組大鼠每日灌胃1次，共喂服3個月。 5.應(yīng)用骨組織形態(tài)計量學(xué)，對骨質(zhì)疏松大鼠第三腰椎二維平面的動、靜態(tài)參數(shù)進(jìn)行測量。 6.各組隨機(jī)選取3個標(biāo)本在二維基礎(chǔ)上利用連續(xù)切片攝像及圖像數(shù)碼處理技術(shù)重建腰椎骨小梁的空間結(jié)構(gòu)，結(jié)合計算機(jī)3D-Doctor軟件測量相關(guān)三維參數(shù)。 7.各組取第4腰椎進(jìn)行生物

6、力學(xué)凹入試驗(yàn)，檢測其松質(zhì)骨的最大載荷和剛度。 8.統(tǒng)計分析：所有數(shù)據(jù)以x±s表示，用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析，如果數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，用one-wayANOVA檢驗(yàn)不同組間有無顯著差異。如果方差齊性，用LSD法比較不同組間差異，如果方差不齊，則用Welch檢驗(yàn)，多組間用Dunnett'sT3比較分析。相關(guān)分析采用多變量偏相關(guān)分析法，兩組間比較用配對T檢驗(yàn)。P<0.05有顯著性差別。 結(jié)果： 1.去勢后的

7、模型組較之假手術(shù)組，骨小梁分離度、骨形成率、骨礦化沉積率、每毫米破骨細(xì)胞數(shù)顯著升高，骨小梁面積百分?jǐn)?shù)、體積百分?jǐn)?shù)、厚度、數(shù)量、體元總數(shù)、剛度和最大載荷均顯著下降； 2.骨形態(tài)計量學(xué)結(jié)果顯示：經(jīng)過不同劑量的骨靈片治療后，各劑量組和雌激素對照組骨小梁分離度均有顯著下降；中高劑量組和雌激素組骨小梁面積百分?jǐn)?shù)、厚度和數(shù)量顯著升高。中劑量組的骨小梁厚度比雌激素對照組有顯著增加。 去卵巢組與假手術(shù)組比較可見，各動態(tài)參數(shù)均顯著升高。各

8、劑量骨靈片組和雌激素組與去卵巢組比較，BFR/BS、BFR/BV、Oc.N/mm顯著降低，骨靈片中劑量組的BFR/TV和中高劑量組的MAR減少具有顯著差異。骨靈片治療組與雌激素對照組比較，中高劑量組在動態(tài)參數(shù)上差異沒有顯著性。 3.三維重建后的結(jié)果顯示，經(jīng)治療后，雌激素對照組、骨靈片各劑量組的體元總數(shù)以及骨靈片中、高組的骨小梁體積百分?jǐn)?shù)較之于模型組有顯著增高，且高劑量組的體元總數(shù)增加較雌激素對照組顯著。 4.相關(guān)分析顯示

9、三維體元總數(shù)及骨小梁體積百分比與二維骨小梁面積百分?jǐn)?shù)、骨小梁厚度、骨小梁數(shù)量呈顯著正相關(guān)，與骨小梁分離度呈顯著負(fù)相關(guān)。三維重建前后的骨小梁體積百分?jǐn)?shù)無顯著差異； 5.生物力學(xué)上，經(jīng)過不同劑量的骨靈片治療后，雌激素組和骨靈片各劑量組剛度以及骨靈片中高劑量組的最大載荷較之于去卵巢組均有顯著升高。與雌激素對照組比較，高劑量組在最大載荷上改善具有顯著差異。 結(jié)論： 補(bǔ)腎中藥骨靈片具有降低骨轉(zhuǎn)換的作用，可以顯著增加骨小梁的