荊芥連翹湯促愈小腿潰瘍臨床與實驗研究.pdf

1、一、選題依據(jù) 小腿潰瘍是皮膚科和中醫(yī)外科的常見病癥。病因復(fù)雜多樣，其中血管性疾病所致，約占70％以上，包括靜脈曲張性潰瘍，動脈性潰瘍，血管炎性潰瘍?nèi)箢?，有?shù)十種皮膚病。此外有神經(jīng)性潰瘍，物理性潰瘍，以及感染性，血液病性潰瘍等。臨床上常常久治不愈，缺少有效治療方法。 目前，國內(nèi)西醫(yī)在治療小腿潰瘍方面，文獻報道較多是胰島素、前列腺素、表皮細胞生長因子、血漿纖維結(jié)合蛋白、1.6一二磷酸果糖、堿性成纖維細胞生長因子、異透明質(zhì)酸

2、、阿魏酸納等。療程長、費用昂貴以及安全性考慮，都還存在問題。另外，西醫(yī)外科截肢手術(shù)適應(yīng)癥掌握與外科醫(yī)生認知水平密切相關(guān)，有時會給患者帶來不必要的問題，為尋找費用低、療效好而安全的促愈治療方法，是國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界近期重要的研究課題。 二、研究內(nèi)容： 1荊芥連翹湯浸泡治療小腿慢性潰瘍臨床觀察 2荊芥連翹湯體外抑菌實驗。 3四種兔小腿潰瘍模型比較的研究。 4荊芥連翹湯化腐生肌實驗。 5荊芥連翹湯對兔

3、小腿潰瘍模型修復(fù)機理的研究。 三、方法與結(jié)果： (一)荊芥連翹湯浸泡治療小腿慢性潰瘍臨床觀察 我們對2003～2005年確診小腿慢性潰瘍的門診或住院患者，其中男性29例，女性25例，年齡15～78歲，平均58歲，病程3個月～12年。按病因分類，墜積性潰瘍者21例，糖尿病性潰瘍者6例，白血病合并外傷引起者2例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并血管炎引起者8例，外傷感染者12例，結(jié)節(jié)性動脈炎所致者3例、硬皮病合并小腿潰瘍者2例；按

4、面積分類，面積＜3cm2者33例，3-6cm2者14例，＞6cm2者7例；按部位分類，單側(cè)肢體者39例，雙側(cè)肢體者15例。治療方法以荊芥連翹湯為基本方，每日一劑，水煎30分鐘，藥量視病變部位而定，晾溫后浸泡病變部位，每次120分鐘，一日兩次，浸泡后暴露患處，15天為1療程。 結(jié)果：21例墜積性潰瘍，治愈6例，顯效11例，有效4例。6例糖尿病性潰瘍，顯效2例，有效3例。2例血液病所致小腿潰瘍，治愈1例，顯效1例。8例SLE合并脈管

5、炎，顯效4例，有效3例。12例外傷感染性潰瘍，治愈5例，顯效4例，有效3例。3例結(jié)節(jié)性動脈炎引起小腿潰瘍，顯效1例，有效2例。2例硬皮病合并小腿潰瘍，有效1例。荊芥連翹湯浸泡治療54例小腿潰瘍，總有效率達94.4％。經(jīng)過30天治療，其治愈率59％，顯效率91％，總有效率達100％；未見明顯不良反應(yīng)。在治療過程中，均無肝腎功能損害；僅2例在浸泡治療過程中，由于中藥濃度過低，局部出現(xiàn)水腫現(xiàn)象，停用2天后癥狀消失。 (二)荊芥連翹湯體

6、外抑菌實驗 我們設(shè)計了荊芥連翹湯體外抑菌試驗，以證實荊芥連翹湯對皮膚潰瘍常見細菌可能具有抑菌作用。實驗步驟有：1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備。2、不同濃度含藥培養(yǎng)基的制備。3、菌液配制。4、抑菌實驗觀察有無細菌生長，細菌不生長的最高藥物稀釋度，即為細菌最低抑菌濃度(MIC)。實驗結(jié)果：紅霉素對表皮葡萄菌最低抑菌濃度為0.125g/ml、對金黃色葡萄球菌為0.250g/ml，對大腸桿菌、綠膿桿菌不敏感。荊芥連翹湯最低抑菌濃度對表皮葡萄球菌為

7、0.015625g/ml，金黃色葡萄球菌為0.03125g/ml，對大腸桿菌為0.015625g/ml，對綠膿桿菌為0.015625g/ml，荊芥連翹湯對引起小腿潰瘍主要致病菌具有明顯的抑制作用。 (三)四種兔小腿潰瘍模型比較的研究 四種造模的方法：A、單純手術(shù)取皮法。B、手術(shù)取皮+常見細菌接種。C、絲裂霉素局封法。D、絲裂霉素局封+手術(shù)取片法。觀察各組創(chuàng)面大小、顏色、分泌物、肉芽組織情況及創(chuàng)面隨時間推移的變化，每三天記

8、錄一次。四種造模方法均在造模后第三天分別在各皮損邊緣取材，將組織塊的一半做常規(guī)病理，經(jīng)HE染色后光鏡觀察。將組織塊的另一半經(jīng)處理后做電鏡觀察。結(jié)果：肉眼觀察：A組：造模第12天時潰瘍面完全愈合。B組：造模第15天時，潰瘍面完全愈合。C組：造模第9-24天時形成局部壞死性黑痂，27-30天脫落愈合。D組：造模第3-9天潰瘍分泌物多，周圍有0.5-1cm的暗紅色區(qū)域；第12-24天潰瘍面直徑約1.8cm，深達肌層，表面有黃色分泌物，周圍有暗

9、紅色斑。第39-45天后潰瘍尚未愈合，新鮮肉芽生長良好，52天時完全愈合。光鏡結(jié)果：A組和B組：表皮部分缺損，真皮淺層水腫，毛細血管擴大充血，周圍有中性粒細胞為主的炎細胞浸潤。C組和D組：表皮及真皮均見大片組織水腫、變性、壞死，壞死組織周圍有大量中性粒細胞浸潤及散在的紅細胞分布。 (四)荊芥連翹湯化腐生肌實驗 按照我國中醫(yī)藥管理局對化腐生肌實驗要求，采用5％、15％、30％三種濃度荊芥連翹湯，與傳統(tǒng)祛腐生肌中藥生肌玉紅湯

10、組、生理鹽水組對照。分別采用30min、60min、120min三個時間段，浸泡、濕敷兩種外治方法，促愈兔實驗性小腿皮膚潰瘍。觀察潰瘍大小、創(chuàng)面炎癥反應(yīng)、滲出物、肉芽組織新生情況，評估其化腐生肌效果。方法：1、建立實驗兔小腿皮膚潰瘍模型(方法同兔小腿慢性潰瘍模型D組)。2、藥品制備：荊芥連翹湯組：荊芥連翹湯共生藥254g，共3付分別水煎濃縮成847ml，1693ml，5080ml，即得到30％(高濃度)，15％(中濃度)，5％(低濃度)

11、溶液。陽性對照生肌玉紅方組(參考生肌玉紅膏《外科正宗》)：共生藥254，共3付分別水煎濃縮1693ml，同上配制得到15％(中濃度)溶液。陰性對照組：0.9％氯化鈉溶液。3、9只實驗兔隨機分組編號，每3天測量各組潰瘍面長徑和短徑，平估愈合速度；記錄各組潰瘍面炎癥反應(yīng)、滲出物、肉芽組織新生情況。應(yīng)用SPSS13.0軟件分析，采用多重比較的方差分析。 (五)荊芥連翹湯對兔小腿潰瘍模型修復(fù)機理的研究 將荊芥連翹湯與生肌玉紅湯和

12、生理鹽水做陽性及陰性對照，對治療實驗性兔小腿潰瘍模型過程中的組織病理、電鏡觀察及VEGF、CD34免疫組織化學(xué)標記顯微圖像分析進行研究。方法：1、成年新西蘭雄性大白兔9只。2、動物模型的建立(同荊芥連翹湯化腐生肌實驗)。3、取材及染色：分別取15％荊芥連翹湯、15％生肌玉紅湯、生理鹽水浸泡小腿潰瘍的患肢60分鐘組，治療前及治療18天時潰瘍邊緣組織。一半常規(guī)病理檢查，VEGF和CD34試劑兩種免疫組織化學(xué)染色標記。另一半組織固定、超薄切片

13、、透射電鏡觀察、SIS成像。4、結(jié)果判斷及統(tǒng)計學(xué)分析：免疫組化標記以棕黃色顆粒狀沉積為陽性。比較確定陽性血管內(nèi)皮細胞和微血管，進行低倍鏡下(×10)觀看。隨機選取2個視野，計算陽性血管內(nèi)皮細胞和微血管計數(shù)和陽性微血管面積計數(shù)。結(jié)果：常規(guī)病理：荊芥連翹湯組切片中見大量新生毛細血管，增生的成纖維細胞，和以淋巴細胞、漿細胞為主的炎細胞浸潤。生肌玉紅湯組切片中同樣見大量新生毛細血管，增生的成纖維細胞較荊芥連翹湯組少，也見以淋巴細胞、漿細胞為主的

14、炎細胞浸潤。生理鹽水組見大片壞死組織下方有大量炎細胞浸潤，個別新生毛細血管和成纖維細胞。電鏡結(jié)果：荊芥連翹湯和生肌玉紅湯組見：有較多毛細血管周細胞，細胞核大、細胞器豐富和較多幼稚的成纖維細胞，細胞核大、漿少，其中有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。生理鹽水見大量崩解壞死的細胞，細胞器完全消失。 結(jié)論： 1.荊芥連翹湯浸泡治療小腿慢性潰瘍臨床觀察：通過荊芥連翹湯局部浸泡外治小腿慢性潰瘍54例。經(jīng)一個療程(15天)治愈率達31.5％，總有效率

15、達94.4％，經(jīng)過30天治療，其治愈率59％，顯效率91％，總有效率達100％；未見明顯不良反應(yīng)；說明荊芥連翹湯局部浸泡治療多種復(fù)雜病因所致小腿慢性潰瘍有顯著的臨床效果。 2.荊芥連翹湯體外抑菌實驗：采用荊芥連翹湯與紅霉素對照，分別對金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，大腸埃希桿菌，銅綠假單胞菌最低抑菌濃度(MIC)測定。荊芥連翹湯組明顯優(yōu)于紅霉素組，荊芥連翹湯對常見感染菌有顯著抑菌效果。與中醫(yī)學(xué)認為該方具有清熱解毒等功效一致，荊芥連

16、翹湯的抑菌作用是其外用浸泡治療小腿潰瘍的機理之一。 3.四種兔小腿潰瘍模型比較的研究：通過四種方法對兔進行小腿潰瘍造模實驗，從造模的形成及自然愈合時間表明，A組和B組均為急性開放性潰瘍模型。C組和D組為慢性潰瘍模型。D組是絲裂霉素局封加手術(shù)取片法，形成的潰瘍中央潰爛，有膿性分泌物，周圍環(huán)繞暗紅色斑；與臨床相關(guān)疾病從臨床表現(xiàn)，病理表現(xiàn)，愈合方式等方面具有一定相似性，能夠較好模擬臨床上慢性潰瘍的發(fā)生特點，對進一步研究慢性潰瘍的發(fā)病機

17、制及為治療方法提供新思路具有一定的應(yīng)用價值。 4.荊芥連翹湯化腐生肌實驗：經(jīng)多重比較的方差分析顯示：藥物、方法、時間及濃度對潰瘍長短徑的影響的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，從統(tǒng)計圖還可以觀察到濕敷法可能優(yōu)于浸泡法，濃度不一定越高越好，提示臨床采用5％藥物濃度即可，作用時間上，濕敷時間120min者療效可能優(yōu)于濕敷30min、60min者，而浸泡時剛好相反，浸泡時間以30min、60min為宜。從潰瘍創(chuàng)面炎癥反應(yīng)、滲出物、肉芽