線粒體D-環(huán)單核苷酸多態(tài)性與非霍奇金淋巴瘤的患病風(fēng)險及預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、目的:多種腫瘤細胞中線粒體D-環(huán)已成為多態(tài)性研究熱點，但與惡性淋巴瘤的相關(guān)研究卻很少。本實驗通過研究線粒體D-環(huán)（D-loop區(qū)）單核苷酸多態(tài)性(SNPs)，探究其與非霍奇金淋巴瘤的患病風(fēng)險及預(yù)后的相關(guān)性。
　　方法:
　　1收集2001年1月和2004年1月之間在河北醫(yī)科大學(xué)省四院血液內(nèi)科接受治療的河北省內(nèi)133名漢族NHL患者血液樣本，同時也收集了河北省內(nèi)159名漢族健康人的血液樣本作為對照。所有病人臨床資料相對完善。<

2、br>　　2應(yīng)用GENMED全血線粒體DNA萃取試劑盒提取非霍奇金淋巴瘤患者及健康人的線粒體DNA，提取后將其置于-80℃恒溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>　　3 PCR擴增線粒體D-loop區(qū)目的基因，上游引物為5'-CCCCATGCTTACAAGCAAGT-3'（核苷酸16190-16209位點），下游引物為5'-GCTTTGAGGAGGTAAGCTAC-3'（核苷酸602-583位點），擴增的目的片段長度為982-bp，PCR的具體參數(shù)

3、參照PCR預(yù)混試劑盒說明，將PCR產(chǎn)物純化測序，測序使用美國ABIPRISM Genetic Analyzer3100序列分析儀，同一標本采用雙向重復(fù)測序，隨后檢測血標本線粒體DNAD-loop區(qū)單核苷酸多態(tài)性。
　　4通過電話對患者進行隨訪，計算其10年生存率，同時分析與患者臨床特征的關(guān)系。參照基因數(shù)據(jù)庫AC_000021號數(shù)據(jù)，從已經(jīng)完成的NHL患者線粒體D-Loop區(qū)的982bp序列中找出單核苷酸多態(tài)性位點，對不同SNPs位

4、點與患者10年生存率的關(guān)系進行分析。
　　5統(tǒng)計分析:應(yīng)用x2檢驗對SNP位點顯示頻率進行分析;采用KaPlan-Meier法繪制出生存曲線，應(yīng)用Log-Rank檢驗進行組間比較;使用COX比例風(fēng)險回歸模型分析進行多因素生存分析，并以相對危險度和95％可信區(qū)間(95％CI)來表示。所有數(shù)據(jù)結(jié)果應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行分析，P＜0.05，認為差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1在隨訪的133例患者中（54例彌

5、漫型大B細胞淋巴瘤、41例T細胞淋巴瘤、38個其他類型的非霍奇金淋巴瘤），共計91位非霍奇金淋巴瘤患者具有10年隨訪數(shù)據(jù)，其中32個診斷為DLBCL，33個TCL和26個其他類型的非霍奇金淋巴瘤。
　　2在NHL組和對照組的長為982bp線粒體D環(huán)區(qū)中共發(fā)現(xiàn)140個單核苷酸多態(tài)性位點，其中有26個SNPs，其等位基因頻率＞5％，可用來分析罹患腫瘤風(fēng)險。
　　3應(yīng)用x2檢驗在對單個SNPs進行分析時，在NHL患者中發(fā)現(xiàn)73A/

6、G，263A/G和315C/Cinsert這三個多態(tài)性位點P值均＜0.05，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。200A/G多態(tài)位點在彌漫大B細胞淋巴瘤患者中的P值＜0.05，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。16362C/T和249Del/AP值均＜0.05，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4對不同的性別及年齡（以60歲為界）NHL患者的10年生存率進行比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);對不同的疾病分期及IPI評分NHL患者的10年生存率進行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意

7、義（P＜0.05）。
　　5根據(jù)所找出的26個SNPs位點，繪制生存曲線，通過Log-Rank檢驗，發(fā)現(xiàn)146C/T、309Cinsert/C、315Cinsert/C、199C/T、16304C/T多肽位點與NHL的生存期有關(guān)。通過COX比例風(fēng)險回歸模型分析這些核苷酸位點及臨床特征與NHL患者10年生存率的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)16304C/T位點是NHL患者的預(yù)后獨立預(yù)測因子，基型為16304C的非霍奇金淋巴瘤患者的生存長度明顯短于基

8、因型為16304T的患者(OR0.513;95％CI0.266-0.989; P=0.046)。
　　結(jié)論:
　　1線粒體DNAD-loop區(qū)是一個高度多態(tài)性區(qū)域。
　　273A/G、263A/G、315C/Cinsert多態(tài)位點與非霍奇金淋巴瘤的患病風(fēng)險相關(guān)，攜帶73G、263G、315Cinsert等位基因可增加患非霍奇金淋巴瘤的風(fēng)險。
　　3200A/G多肽位點特別與彌漫大B細胞淋巴瘤風(fēng)險相關(guān)，攜帶200G