β1-腎上腺素能受體基因單體型與原發(fā)性高血壓關(guān)聯(lián)分析及功能鑒定.pdf

1、β1-腎上腺素能受體(β1-adrenergic receptor，β1-AR)屬于G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein coupled receptor，GPCR)超家族，在血壓調(diào)控上發(fā)揮著重要作用。目前，關(guān)于β1-AR基因多態(tài)性的研究熱點主要集中在49S>G(145A/G)和389R>G(1165C/G)兩個編碼區(qū)單核苷酸多態(tài)性(coding-region single nucleotidepolymorphism，cSNP)位點，但

2、結(jié)論不一。迄今為止尚無49S>G和389R>G位點構(gòu)成的單體型(SR、GR、SG、GG)與原發(fā)性高血壓(essential hypertension，EH)的相關(guān)性報道，本研究的目的在于從單體型角度探討β1-AR基因單體型與EH的相關(guān)性及其對受體活性影響。 材料與方法： 1、從遼寧省高血壓高發(fā)區(qū)彰武縣人群中，選取高血壓患者和健康對照共391人進行病例一對照研究。并統(tǒng)計分析β1-AR基因49S>G和389R>G構(gòu)成的單體型

3、SR、GR、SG、GG與EH的關(guān)聯(lián)性。 2、構(gòu)建β1-AR基因四種單體型表達載體pcDNA3.1(+)-β1-AR，將其轉(zhuǎn)染入COS7細胞，構(gòu)建COS7穩(wěn)定表達細胞株。 3、檢測β1-AR單體型穩(wěn)定表達的COS7細胞內(nèi)cAMP、腎素及鈣離子的基礎(chǔ)水平以及β1-AR激動劑異丙腎上腺素(isoprenaline，ISO)或去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)和β-阻滯劑美托洛爾作用后的變化。 結(jié)果：

4、 1、在病例一對照人群中體重指數(shù)(body mass index，BMI)、血清甘油三酯(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，T-chol)和低密度脂蛋白(low-densitylipoprotein，LDL)水平在EH組均明顯高于對照組，而高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein，HDL)水平在EH組明顯低于對照組(p<0.05)。因此，BMI、TG、T-chol和L

5、DL為高血壓發(fā)生的危險因素，而HDL是防止高血壓發(fā)生的保護因素。 2、應(yīng)用ARLEQUIN軟件分析，結(jié)果顯示，β1-AR基因上49S>G和389R>G之間存在連鎖不平衡(D’=0.843，r<'2>=0.262，p<0.0001)。其中，SG單體型為主要單體型(51.4％)，而GG單體型比例最低(2.0％)。 3、β1-AR基因的GG單體型是EH的獨立危險因素(OR=3.843，p=0.027)。GG單體型攜帶者的舒張

6、壓水平明顯高于其他單體型攜帶者(92.94±3.55vs.84.31±0.54mmHg，p=0.022)。 4、基礎(chǔ)狀態(tài)下，細胞內(nèi)的cAMP含量按GR>GG>SR>SG(33.44±1.18>27.98±1.17>25.12±0.94>20.08±1.19 pmol/mg)的順序遞減。經(jīng)過刺激因素作用后，與含有389G的單體型細胞相比，ISO誘導(dǎo)的cAMP增加在含有389R的單體型細胞更為明顯(SR 159.48％±21.35％

7、，GR 99.86％±11.33％vs.SG 61.98％±1.54％，GG44.03％±4.99％，p<0.01)；美托洛爾作用的cAMP下降也是如此(SR 84.51±8.94％，GR 78.51±8.36％vs.SG 42.83±4.15％，GG 3.87±2.63％，p<0.05)。在四種單體型中，GG單體型細胞的cAMP變化最不明顯。 5、β1-AR經(jīng)NE持續(xù)刺激后，SG單體型受體較GG單體型受體脫敏更完全(96.87

8、％±0.89％vs.78.75％±2.96％，p<0.001)。 6、基礎(chǔ)狀態(tài)下，GG單體型細胞腎素活性最高，而SG單體型細胞腎素活性最低(GG 9.37±0.32，GR 6.89±0.21，SR 6.62±0.26和SG 4.93±0.20 pg/μg/h)。與細胞內(nèi)cAMP變化一致，經(jīng)過β1-AR激動劑和阻滯劑作用后，腎素活性在含有389R的單體型細胞較含有389G的單體型細胞變化幅度更大(ISO：SR 68.48±5.04

9、％，GR62.54％±5.69％vs.SG 35.97％3.13％，GG 20.98％±3.11％，p<0.01；美托洛爾：SR36.75％±3.84％，GR 33.97％±3.48％vs.SG 15.95％±2.86％，GG 1.63％±0.46％，p<0.01)。同樣，在四種單體型中，GG單體型細胞腎素變化幅度最小。 7、基礎(chǔ)狀態(tài)下，SG和GG單體型細胞內(nèi)鈣離子無明顯差別。經(jīng)ISO刺激20hr后，GG單體型細胞內(nèi)的鈣離子水平

10、明顯高于SG單體型細胞(372.29±24.33 vs. 286.51±1.33nmol/L，P=0.017)。 結(jié)論： 1、β1-AR基因49S>G和389R>G兩個cSNP位點間存在連鎖不平衡。在彰武縣人群中，SG單體型為主要單體型，而GG單體型比例最低。 2、與49S>G多態(tài)相比，389R>G多態(tài)對β1-AR活性的影響更大。 3、GG單體型受體活性最低，脫敏能力差，對β1-AR激動劑和阻滯劑