PDTC對LPS誘導(dǎo)的角膜基質(zhì)細胞和角膜炎損傷的干預(yù)作用及機制的研究.pdf

1、研究背景：細菌性角膜炎是臨床常見病和多發(fā)病，嚴(yán)重者可引起角膜潰瘍、穿孔及瘢痕形成，嚴(yán)重影響視功能。炎癥性角膜病發(fā)生發(fā)展的主要機制是致炎因素促使角膜組織分泌細胞因子增多及粘附分子表達增強。研究表明，角膜炎時角膜組織表達多種與角膜的病理損傷密切相關(guān)的細胞因子。細胞因子的表達受特定轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)在炎癥反應(yīng)的細胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)中起重要作用，通過對下游多種炎癥相關(guān)基因(TNF-α、IL-1、IL-6等)的轉(zhuǎn)錄，參與多

2、種基因的表達與調(diào)控，與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細胞的增生、轉(zhuǎn)化和凋亡等主要病理、生理過程密切相關(guān)。因此，靶向抑制NF-κB活化可望減輕炎癥反應(yīng)。脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌細胞壁的組成部分，是革蘭氏陰性菌致病的主要活性成分。LPS可通過激活NF-κB信號途徑，誘導(dǎo)炎癥因子的表達，引起細胞損傷和凋亡，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)。角膜基質(zhì)細胞可以通過識別LPS，誘導(dǎo)細胞表達細胞因子、促進白細胞浸潤到角膜組織，在角膜防御系統(tǒng)中起重要作用。本實驗中，①原代培養(yǎng)

3、人角膜基質(zhì)細胞(HCF<,s>)，用綠膿桿菌LPS刺激HCF<,s>，酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測HCF<,s>培養(yǎng)上清中炎性相關(guān)因子白細胞介素-6(IL-6)和IL-8的分泌，Western b10t檢測tCF<,s> NF-κB的活化表達，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測HCF<,s> IL-6、IL-8基因的表達；②建立綠膿桿菌LPS誘導(dǎo)的大鼠急性角膜炎動物模型，用免疫組織化學(xué)的方法原位檢測角膜組織NF-κ Bp65及

4、細胞間粘附分子-1(ICAM-1)蛋白的表達、RT-PCR檢測角膜組織IL-6、工CAM-1、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及緊密連接蛋白Occludin基因的表達，Western blot檢測角膜組織NF-κ Bp65核轉(zhuǎn)位情況及Occludin的蛋白表達；③以NF-κB的特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作為干預(yù)因素，觀察它以LPS誘導(dǎo)的人角膜基質(zhì)細胞及大鼠急性角膜組織中NF-kB的活化表達及相關(guān)因子表達的影響，并探討其發(fā)

5、生機制，為發(fā)現(xiàn)角膜炎新的預(yù)防措施和輔助治療提供理論基礎(chǔ)。 目的：觀察核轉(zhuǎn)錄因子一kB在綠膿桿菌LPS誘導(dǎo)的人角膜基質(zhì)細胞和大鼠急性角膜炎角膜損傷的作用，探討PDTC的干預(yù)作用及其機制。 結(jié)論：綠膿桿菌LPS可引起人角膜基質(zhì)細胞和角膜炎大鼠角膜組織NF-кB的核移位，活化的NF-к B與相關(guān)基因的啟動子或增強子區(qū)結(jié)合以促進這些依賴NF-кB的致炎因子基因轉(zhuǎn)錄，參與人角膜基質(zhì)細胞和急性角膜炎大鼠損傷的病理過程，在角膜炎中起