消退素D1對脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性角膜炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制.pdf

1、目的：探討脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)小鼠急性角膜炎的臨床表現(xiàn)和炎癥因子的表達(dá)水平變化;研究消退素D1(RvD1)在LPS誘導(dǎo)小鼠急性角膜炎癥中發(fā)揮的作用，對細(xì)胞因子及趨化因子的影響，探索消退素D1促進(jìn)炎癥消退的分子機(jī)制，初步了解其可能參與的信號(hào)通路。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)包括兩個(gè)部分，第一部分通過建立LPS誘導(dǎo)小鼠急性角膜炎模型，觀察急性期的臨床表現(xiàn)，通過病理學(xué)及免疫組織化學(xué)的方法研究其炎癥特點(diǎn)，然后使

2、用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測LPS處理前后角膜組織內(nèi)IL-1β、IL-6、MCP-1及MIP-2四種細(xì)胞因子及趨化因子的表達(dá)。第二部分使用不同濃度RvD1(50ng/d和500ng/d)對急性期角膜組織進(jìn)行局部干預(yù)，觀察1、3、5天時(shí)RvD1對角膜混濁程度及上皮愈合速度的影響;比較角膜組織炎癥反應(yīng)程度;應(yīng)用熒光定量PCR及ELISA方法檢測IL-1β、IL-6、MCP-1及MIP-2四種炎癥因子在角膜組織中mRNA及蛋白水平上的表達(dá)差異

3、;并通過western blot方法檢測NF-κB信號(hào)途徑中內(nèi)源性NF-κB抑制因子IκBα在角膜組織中表達(dá)水平的變化，從而探索RvD1可能參與炎癥反應(yīng)的信號(hào)通路。
　　結(jié)果：
　　1、LPS刺激后小鼠角膜混濁，HE染色及免疫組化顯示角膜基質(zhì)內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤，1～3天達(dá)高峰，3～5天逐漸減輕;
　　2、LPS刺激后角膜基質(zhì)細(xì)胞合成的細(xì)胞因子IL-1β和IL-6，趨化因子MCP-1和MIP-2的mRNA表達(dá)水平較正常小鼠

4、明顯增加(P＜0.05);
　　3、通過RvD1-50組（低劑量50ng/d）、RvD1-500(高劑量500ng/d)和對照組(PBS)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)RvD1可明顯減輕角膜炎癥后混濁程度，加快上皮愈合速度;HE染色及免疫組化顯示RvD1可減少中性粒細(xì)胞數(shù)量，防止中性粒細(xì)胞持續(xù)浸潤;
　　4、熒光實(shí)時(shí)定量PCR和ELISA檢測發(fā)現(xiàn)RvD1可降低急性期角膜組織IL-1β、IL-6、MCP-1和MIP-2的在mRNA水平和蛋白水

5、平的表達(dá)，且和劑量呈正相關(guān);
　　5、western blot顯示在1天和3天時(shí)RvD1-500ng/d與對照組相比可增加LPS誘導(dǎo)后NF-κB抑制因子IκBα的表達(dá)，而在5d時(shí)差異不明顯。
　　結(jié)論：LPS刺激后小鼠角膜組織內(nèi)細(xì)胞因子IL-1β和IL-6，趨化因子MCP-1和MIP-2的mRNA表達(dá)水平較正常小鼠明顯增加，提示IL-1β、IL-6、MCP-1和MIP-2可能參與了角膜炎癥反應(yīng)。RvD1減輕角膜炎癥后混濁程度