消退素D1在大鼠燒傷疼痛中的作用及機(jī)制.pdf

1、背景：
　　消退素（resolvins,Rvs）是來(lái)源于ω-3多不飽和脂肪酸的內(nèi)源性促炎癥消退介質(zhì)，包括D系和E系消退素，在多種炎性動(dòng)物模型中具有抗炎和促炎癥消退作用。最近的研究發(fā)現(xiàn)Rvs還能通過(guò)調(diào)節(jié)各種瞬時(shí)受體電位通道的活性、促炎因子和抗炎介質(zhì)的表達(dá)及中樞敏化的形成等有效減輕炎性疼痛、術(shù)后疼痛和神經(jīng)病理性痛。脊髓膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的p-p38MAPK和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic

2、factor,BDNF）及其受體原肌球蛋白相關(guān)激酶B(tropomyosin-related kinase B，TrkB)在神經(jīng)病理性痛的形成中發(fā)揮重要作用，而燒傷疼痛含有神經(jīng)病理性痛的成分。因此，它們可能也參與燒傷疼痛的形成。體內(nèi)外研究表明Rvs可以抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)p38 MAPK磷酸化，減少其分泌炎性介質(zhì)。因此，我們提出假說(shuō)消退素D1（resolvin D1,RvD1）可能通過(guò)抑制脊髓背角內(nèi)膠質(zhì)細(xì)

3、胞活化、小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)p38 MAPK磷酸化、下調(diào)BDNF/TrkB受體信號(hào)，從而減輕燒傷疼痛。
　　目的：
　　本研究通過(guò)建立大鼠燒傷模型、腹腔注射RvD1探索RvD1在燒傷疼痛中的作用及其機(jī)制；通過(guò)鞘內(nèi)注射SB203580抑制p38MAPK活化，觀察燒傷大鼠的痛行為學(xué)變化，檢測(cè)脊髓背角Iba-1、BDNF和TrkB的表達(dá)水平的變化，從而探討p38 MAPK活化在RvD1對(duì)于燒傷疼痛作用機(jī)制中所發(fā)揮的作用；通過(guò)鞘內(nèi)注射Trk

4、B-Fc抑制BDNF/TrkB信號(hào)，觀察燒傷大鼠的痛行為學(xué)變化，檢測(cè)脊髓背角Iba-1和p-p38 MAPK的表達(dá)水平的變化，從而探討B(tài)DNF/TrkB信號(hào)在RvD1對(duì)于燒傷疼痛作用機(jī)制中所發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　1.140～150g清潔級(jí)雄性SD大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組（n=6）：假傷組（Sham+Veh1組），燒傷組（Burn+Veh1組），燒傷+RvD1低劑量組（Burn+R(S)組），燒傷+RvD1高劑量組（

5、Burn+R(L)組），假傷+RvD1高劑量組（Sham+R(L)組）。制備燒傷模型，于燒傷前30min及燒傷后1-7d分別腹腔注射100ng、300ngRvD1或?qū)φ杖軇￢eh1。分別于燒傷前1d和燒傷后1、3、5、7、14d測(cè)定大鼠機(jī)械縮足反應(yīng)閾（MWT）。于燒傷后7dMWT測(cè)定結(jié)束后處死3只大鼠，用熒光免疫組化檢測(cè)脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物Iba-1和GFAP、p-p38MAPK、BDNF/TrkB的表達(dá)水平。用免疫熒光雙

6、標(biāo)檢測(cè)p-p38MAPK分別與Iba-1、GFAP和NeuN的共標(biāo)情況。
　　2.140～150g清潔級(jí)雄性SD大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組（n=6）：Sham+Veh2組，Burn+Veh2組，Burn+SB203580組，Sham+SB203580組，Burn+R(L)組。制備燒傷模型，于造模后7d分別鞘內(nèi)注射SB203580或?qū)φ杖軇￢eh2，Burn+R(L)組腹腔注射RvD1方法同前。分別于鞘內(nèi)注藥前、鞘內(nèi)注藥后15min

7、、30min、1h和2h測(cè)定大鼠MWT。大鼠MWT測(cè)定結(jié)束后處死3只大鼠，用熒光免疫組化檢測(cè)脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物Iba-1和BDNF/TrkB的表達(dá)水平。
　　3.140～150g清潔級(jí)雄性SD大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組（n=6）：Sham+Veh3組，Burn+Veh3組，Burn+TrkB-Fc組，Sham+TrkB-Fc組，Burn+R(L)組。制備燒傷模型，于造模前1h和造模后1-7d用微量注射器通過(guò)鞘內(nèi)置管分別給予Trk

8、B-Fc或?qū)φ杖軇￢eh3，Burn+R(L)組腹腔注射RvD1方法同前。分別于燒傷前1d和燒傷后1、3、5、7、14d測(cè)定大鼠MWT。于燒傷后7dMWT測(cè)定結(jié)束后處死3只大鼠，用熒光免疫組化檢測(cè)脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物Iba-1和p-p38 MAPK的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.與Sham+Veh1組比較，Burn+Veh1組燒傷后各時(shí)點(diǎn)MWT降低（P<0.05）；與Burn+Veh1組比較，Burn+R(S)組和Burn

9、+R(L)組燒傷后各時(shí)點(diǎn)MWT均升高（P<0.05）；與Burn+R(S)組比較，Burn+R(L)組燒傷后各時(shí)點(diǎn)MWT升高（P<0.05）。免疫熒光顯示，與Sham+Veh1組比較，Burn+Veh1組脊髓背角Iba-1、GFAP、p-p38 MAPK、BDNF和TrkB受體表達(dá)水平均升高（P<0.05）；與Burn+Veh1組比較，Burn+R(L)組脊髓背角Iba-1、GFAP、p-p38 MAPK、BDNF和TrkB受體表達(dá)水平

10、均降低（P<0.05）。免疫熒光雙標(biāo)顯示，p-p38 MAPK只與Iba-1共標(biāo)，而不與GFAP和NeuN共標(biāo)。
　　2.與Sham+Veh2組相比，Burn+Veh2組MWT降低（P<0.05）；與Burn+Veh2組相比，Burn+SB203580組MWT升高（P<0.05）；與Burn+SB203580組注藥后各時(shí)點(diǎn)相比，Burn+R(L)組MWT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。免疫熒光顯示，與Sham+Veh2組相比，B

11、urn+Veh2組和Burn+SB203580組Iba-1、BDNF和TrkB受體表達(dá)水平均升高（P<0.05）；與Burn+Veh2組相比，Burn+SB203580組Iba-1、BDNF和TrkB受體表達(dá)水平均降低（P<0.05）。
　　3.與Sham+Veh3組相比，Burn+Veh3組燒傷后各時(shí)點(diǎn)MWT降低（P<0.05）；與Burn+Veh3組相比，Burn+TrkB-Fc組注藥后MWT升高（P<0.05）；與Burn+

12、TrkB-Fc組相比，Burn+R(L)組MWT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。免疫熒光顯示，與Sham+Veh3組相比，Burn+Veh3組和Burn+TrkB-Fc組Iba-1和p-p38 MAPK表達(dá)水平均升高（P<0.05）；與Burn+Veh3組相比，Burn+TrkB-Fc組Iba-1和p-p38MAPK表達(dá)水平均降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　消退素D1（resolvinD1,RvD1）可通過(guò)抑制脊髓