Caspase-3在大鼠骨骼肌挫傷愈合過(guò)程中的表達(dá)及其時(shí)間規(guī)律性研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠骨骼肌挫傷模型的基礎(chǔ)上，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)、Western blot技術(shù)以及caspase-3活性測(cè)定技術(shù)對(duì)大鼠骨骼肌挫傷愈合過(guò)程中caspase-3的表達(dá)進(jìn)行研究，用以推測(cè)caspase-3在骨骼肌挫傷愈合過(guò)程中的生物學(xué)作用，并對(duì)其表達(dá)時(shí)間變化規(guī)律在推斷損傷時(shí)間中的可應(yīng)用性進(jìn)行了探討。 材料和方法： 一、動(dòng)物模型的建立和分組健康成年的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只，體重220-

2、250g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為10組，每組3只，其中9組為實(shí)驗(yàn)組，1組為對(duì)照組。 二、免疫組織化學(xué)染色 三、caspase-3的Western blot檢測(cè) 四、caspase-3活性測(cè)定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 一、挫傷組骨骼肌病理組織學(xué)變化傷后3h見(jiàn)挫傷處骨骼肌局部出血、水腫、變性，部分肌纖維斷裂，偶見(jiàn)少量多核粒細(xì)胞。6h部分骨骼肌胞漿均質(zhì)化，細(xì)胞核消失，骨骼肌間隙內(nèi)炎細(xì)胞增多。12h

3、挫傷的骨骼肌間隙及周邊出現(xiàn)較多量的炎細(xì)胞。1d挫傷的骨骼肌間隙及周邊大量的炎細(xì)胞。3d損傷處有大量的細(xì)胞核出現(xiàn)。5d天可見(jiàn)肌細(xì)胞核增殖，核均位于細(xì)胞中央。7d新形成的肌細(xì)胞進(jìn)一步增多，可見(jiàn)膠原形成。10d再生過(guò)程更近一步，部分區(qū)域可見(jiàn)較多量的膠原形成。14d仍可觀察到骨骼肌再生和膠原形成。 二、挫傷周邊區(qū)caspase-3的免疫組織化學(xué)染色對(duì)照組骨骼肌未見(jiàn)陽(yáng)性信號(hào)；挫傷周邊骨骼肌在損傷后3h開(kāi)始出現(xiàn)弱陽(yáng)性表達(dá)，隨時(shí)間延長(zhǎng)陽(yáng)性表達(dá)

4、逐漸增強(qiáng)，5d達(dá)到高峰，隨后陽(yáng)性表達(dá)逐漸降低，14d仍然有較強(qiáng)的陽(yáng)性表達(dá)。相鄰兩組之間caspase-3陽(yáng)性表達(dá)的面積和積分光密度值均有顯著差異(P<0.05)。 三、caspase-3在挫傷區(qū)的表達(dá)損傷后3h可見(jiàn)挫傷區(qū)骨骼肌開(kāi)始出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)；損傷后6h-1d，可見(jiàn)被炎細(xì)胞浸潤(rùn)的骨骼肌表達(dá)caspase-3；損傷后3d，可見(jiàn)新形成的骨骼肌核位于細(xì)胞中央部位，胞漿內(nèi)有caspase-3陽(yáng)性表達(dá)；傷后5-7d，可見(jiàn)新形成的肌細(xì)胞胞漿

5、內(nèi)有caspase-3表達(dá)；損傷后10-14d，融合的肌細(xì)胞內(nèi)仍然有caspase-3的表達(dá)。 四、挫傷周邊區(qū)caspase-3的Western blot結(jié)果分析對(duì)照組骨骼肌未見(jiàn)表達(dá)；隨后表達(dá)量逐漸上升，5d達(dá)到高峰，以后逐漸下降，14d時(shí)仍有表達(dá)。 五、挫傷周邊區(qū)caspase-3活性表達(dá)的倍增值： 與對(duì)照組相比，caspase-3活性倍增值隨損傷時(shí)間延伸而增高，損傷后12hcaspase-3的活性明顯增高達(dá)8

6、.6倍，5d時(shí)活性增高值達(dá)到最大為17.1倍，以后隨時(shí)間延伸，caspase-3的活性倍增值逐漸下降。相鄰兩組之間caspase-3活性表達(dá)的倍增值均有顯著差異(P<0.05)。 結(jié)論： 1、對(duì)照組大鼠下肢骨骼肌中無(wú)caspase-3表達(dá)； 2、大鼠骨骼肌挫傷后，挫傷周邊骨骼肌表達(dá)caspase-3且caspase-3被激活；提示大鼠骨骼肌挫傷后，挫傷周邊骨骼肌發(fā)生凋亡； 3、大鼠骨骼肌挫傷后，新形成的肌