大腸埃希菌對(duì)阿莫西林-克拉維酸耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目的：了解四川大學(xué)華西醫(yī)院大腸埃希菌對(duì)阿莫西林/克拉維酸的耐藥情況；了解大腸埃希菌對(duì)阿莫西林/克拉維酸產(chǎn)生耐藥的分子機(jī)制；了解TEM、SHV、OXA型廣譜酶以及質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC酶在耐藥菌株中的分布；明確整合子在耐藥菌株中的分布以及介導(dǎo)耐藥基因盒類型；探討大腸埃希菌對(duì)阿莫西林/克拉維酸的耐藥特點(diǎn)和機(jī)制，從而為臨床合理用藥及減少耐藥的發(fā)生和耐藥基因傳播提供實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。 方法：收集四川大學(xué)華西醫(yī)院2005年5月至12月臨床分離的對(duì)

2、氨芐西林/舒巴坦耐藥的大腸埃希菌544株，隨機(jī)選取276株進(jìn)行阿莫西林/克拉維酸紙片的篩查，對(duì)篩出的耐藥菌株采用瓊脂對(duì)倍稀釋法進(jìn)行MIC值的測(cè)定和PCR擴(kuò)增分析。對(duì)符合耐酶抑制劑β--內(nèi)酰胺酶耐藥表型的大腸埃希菌進(jìn)行TEM型β-內(nèi)酰胺酶基因的克隆表達(dá)。采用多重PCR技術(shù)對(duì)耐阿莫西林/克拉維酸大腸埃希菌進(jìn)行TEM、SHV、OXA型三種β-內(nèi)酰胺酶的篩查。多重PCR擴(kuò)增質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶基因。用PCR--限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)初篩整

3、合子并分型，PCR擴(kuò)增整合子的可變區(qū)并測(cè)序。 結(jié)果：經(jīng)紙片擴(kuò)散法篩出阿莫西林/克拉維酸耐藥的大腸埃希菌52株，對(duì)其進(jìn)行瓊脂對(duì)倍稀釋法MIC值測(cè)定，阿莫西林/克拉維酸的耐藥率76.9％(40/52)、敏感率為21.2％(11/52)；哌拉西林/他唑巴坦敏感率為80.8％(42/52)。大多數(shù)(94.2％)對(duì)頭孢唑林耐藥，對(duì)頭孢西丁和頭孢他啶的耐藥率依次為：73.1％、26.9％。絕大多數(shù)(98.1％)對(duì)亞胺培南/西司他丁敏感。 T

4、EM、SHV、0XA型三種β-內(nèi)酰胺酶多重PCR擴(kuò)增結(jié)果：TEM型46株，SHV型1株，0XA型6株。 TEM型和SHV型均陽性1株，TEM型和0XA型均陽性5株。產(chǎn)TEM型β-內(nèi)酰胺酶中，TEM-1型最常見，耐酶抑制劑TEM型β-內(nèi)酰胺酶(IRT)未發(fā)現(xiàn)。質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC β-內(nèi)酰胺酶的發(fā)生率為30.8％(16/52)，其中有13株同時(shí)攜帶TEM-1廣譜酶和質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC β-內(nèi)酰胺酶，3株僅攜帶質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC β-內(nèi)酰胺酶。36

5、株(69.2％)耐藥菌株檢出1類整合子，序列分析顯示存在aadA4、 aadA5、 aadB、cmlA、cmlA1、和dfr17基因盒，它們分別介導(dǎo)對(duì)氨基糖苷類抗生素、氯霉素和甲氧芐明的耐藥。 結(jié)論：TEM-1型廣譜酶的高產(chǎn)是華西醫(yī)院大腸埃希菌對(duì)阿莫西林/克拉維酸耐藥主要機(jī)制，另外本次研究首次在西南地區(qū)發(fā)現(xiàn)OXA-1、CMY-2型質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶等β-內(nèi)酰胺酶，它們也是造成耐藥的重要機(jī)制。1類整合子在耐阿莫西林/克拉維酸大腸埃