家蠶ptp和cyp333a2基因的鑒定及其耐氟性功能研究.pdf

1、本研究以鱗翅目模式昆蟲家蠶中的敏感品種734和耐氟品種T6為材料，應(yīng)用差異顯示技術(shù)對家蠶耐氟性相關(guān)基因進行篩選，并分析這些差異基因的功能。氟化物通過污染桑葉造成家蠶大量死亡，嚴重危害蠶桑業(yè)的發(fā)展，同時人類及其他生物也深受其害。闡明家蠶耐氟中毒的機理，為設(shè)計相關(guān)藥物防御及治療氟中毒提供新的方向。
　　其主要結(jié)論如下：
　　1.統(tǒng)計分析家蠶734品種和T6品種5齡期浸葉法添食200mg/kg氟化鈉后的生理生化改變。在200mg/

2、kg的氟化鈉濃度下，T6品種能正常生長，734品種表現(xiàn)明顯氟中毒癥狀，T6耐氟品種死亡率比敏感品種734低，體重增長率與敏感品種734差異顯著。提示T6品種可能存在耐氟基因。
　　2．通過mRNA差異顯示技術(shù)，在家蠶耐氟品種T6和敏感品種734脂肪體中篩選參與解氟代謝相關(guān)的基因，獲得了一個位于線粒體膜上與轉(zhuǎn)運磷酸根離子至線粒體內(nèi)與ADP合成ATP相關(guān)的磷酸根轉(zhuǎn)運蛋白Bmptp基因，半定量結(jié)果顯示Bmptp基因在T6耐氟品種所受氟化

3、物的影響明顯比734品種低，說明氟化物可能通過影響B(tài)mptp基因表達從而影響ATP合成，導(dǎo)致家蠶供能不足，引起中毒癥狀。
　　3．利用氟離子選擇電極法測量家蠶耐氟品種T6和敏感品種734脂肪體的氟濃度，結(jié)果顯示T6能通過氟代謝使體內(nèi)氟濃度維持在安全閥值內(nèi)，而734則累積氟，提示脂肪體可能參與了氟代謝。
　　4.差異顯示實驗過程中獲得了另一個在家蠶耐氟品種T6高表達而在敏感品種734低表達的基因 Bmcyp333a2。RT-P