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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討多環(huán)芳烴暴露對(duì)新生兒調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響。
方法:
第一部分:(1)收集200例新生兒臍帶血,高分辨溶解曲線分析熒光定量法檢測(cè)Treg細(xì)胞,(2)ELISA法檢測(cè)臍帶血PAH-DNA加合物及IL-4濃度,(3)問(wèn)卷調(diào)查隨訪生后1-1.5年,詢問(wèn)嬰幼兒是否反復(fù)喘息和頑固性濕疹,并詢問(wèn)父母是否患哮喘等過(guò)敏性疾病。
第二部分:收集7例新生兒臍帶血,分離 CD4+CD25+T細(xì)胞體外CD3CD28及IL-2
2、誘導(dǎo)培養(yǎng)3天,設(shè)加PAHs組及對(duì)照組。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Foxp3、STAT3、STAT5的表達(dá)及 Treg細(xì)胞抑制功能,結(jié)合重亞硫酸鹽的焦磷酸測(cè)序法檢測(cè)Foxp3基因啟動(dòng)子區(qū)和TSDR區(qū)甲基化水平,RT-PCR檢測(cè) DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、IL-4 mRNA表達(dá)水平,ELISA檢測(cè)培養(yǎng)后上清液IL-4蛋白水平。
結(jié)果:
第一部分:(1)喘息組和濕疹組Treg數(shù)量明顯低于非癥狀組。特應(yīng)性組Treg數(shù)量顯著
3、低于非特應(yīng)性組Treg數(shù)量;特應(yīng)性組中發(fā)生喘息和濕疹組Treg數(shù)量顯著低于非特應(yīng)性組,但非特異性組仍低于無(wú)癥狀組。(2)喘息組和濕疹組 PAH-DNA加合物濃度顯著高于非癥狀組;特應(yīng)性組中發(fā)生喘息和濕疹嬰幼兒PAH-DNA加合物濃度低于非特應(yīng)性組。(3)喘息組和濕疹組臍帶血IL-4濃度明顯高于無(wú)癥狀組。
第二部分:1)PAHs抑制Foxp3表達(dá)及Treg細(xì)胞抑制功能;2)PAHs抑制STAT5表達(dá),p<0.05,上調(diào)STAT3
4、表達(dá),p<0.05;3)PAHs增加Foxp3基因啟動(dòng)子區(qū)和TSDR區(qū)甲基化;4)PAHs上調(diào)DNMT1、DNMT3a、DNMT3b p<0.05;5)PAHs誘導(dǎo)CD4+CD25+T細(xì)胞產(chǎn)生IL-4,IL-4與STAT5表達(dá)呈負(fù)相關(guān),與STAT3表達(dá)呈正相關(guān)。
結(jié)論:
?。?)宮內(nèi)遺傳因素和PAH-DNA加合物可影響Treg分化,Treg細(xì)胞分化相對(duì)不足可能是生后嬰幼兒對(duì)過(guò)敏性疾病形成的原因之一。
(2)P
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