通絡(luò)救腦注射液對離體胚鼠皮層神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、神經(jīng)干細(xì)胞是具有潛在的分化能力的細(xì)胞，即能在一定的條件下能增殖并定向分化，當(dāng)成體神經(jīng)組織受損或神經(jīng)退行性變后，通過定向誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向相應(yīng)的神經(jīng)組織或細(xì)胞分化，進(jìn)而替代損傷組織或細(xì)胞。本研究擬探討通絡(luò)救腦注射液對神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化的影響，拓寬中醫(yī)祛瘀生新法在腦病治療中的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論基礎(chǔ)，希望通過對其深入研究，為外源性神經(jīng)干細(xì)胞的替代治療提供證據(jù)。 1胚鼠皮層神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及通絡(luò)救腦注射液對神經(jīng)干細(xì)胞增殖影響選取E17胎

2、鼠皮層細(xì)胞，通過原代細(xì)胞培養(yǎng)、傳代和免疫熒光方法及MTS/PMS法離體研究通絡(luò)救腦注射液對胚鼠皮層神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，細(xì)胞有Nestin表達(dá)，本研究中分離的細(xì)胞具備了神經(jīng)干細(xì)胞的基本屬性，屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的干細(xì)胞。應(yīng)用MTS/PMS法測定不同濃度、同一時(shí)間點(diǎn)通絡(luò)救腦注射液對神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響和不同時(shí)間點(diǎn)、同一濃度通絡(luò)救腦注射液對神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示通絡(luò)救腦注射液在0.77～123.2μg/ml劑量時(shí)，對神經(jīng)干細(xì)胞

3、的增殖有促進(jìn)作用，在15.4μg/ml時(shí)的作用最強(qiáng)；當(dāng)藥物濃度達(dá)到492.8μg/ml時(shí)，開始對神經(jīng)干細(xì)胞的增殖有抑制作用；當(dāng)藥物濃度在246.4μg/ml時(shí)，給藥組和對照組沒有顯著差異，可能是因?yàn)樗幬飳ι窠?jīng)干細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用和抑制作用達(dá)到了一個(gè)平衡。在15.4μg/ml濃度時(shí)，給予通絡(luò)救腦注射液6h后給藥組與對照組OD值有明顯差異，說明給予通絡(luò)救腦注射液6h后才能起到促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的作用。 2通絡(luò)救腦注射液對離體胚鼠皮層

4、神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化的影響本實(shí)驗(yàn)采用免疫熒光雙標(biāo)的方法和RT-PCR法研究通絡(luò)救腦注射液對胚鼠皮層神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化、自我更新的作用。結(jié)果顯示，與對照組相比，通絡(luò)救腦注射液組Nestin/Brdu、Nestin/Vimentin、Nestin/Tuj-1表達(dá)的陽性細(xì)胞面密度、光密度和細(xì)胞個(gè)數(shù)比對照組明顯增多，統(tǒng)計(jì)具有顯著性差異。Tuj-1、Vimentin、Nestin三種基因的mRNA條帶均在200～300bp之間且接近300bp，

5、給藥組均比空白對照組條帶較寬；且每個(gè)指標(biāo)給藥組和對照組組間的積分光密度值經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，具有顯著性差異。提示通絡(luò)救腦注射液能夠促進(jìn)離體胚鼠皮層神經(jīng)干細(xì)胞的存活和增殖，并且能夠促進(jìn)離體胚鼠皮層神經(jīng)干細(xì)胞分化為新的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。 綜上所述，無血清培養(yǎng)方法可培養(yǎng)Nestin陽性的神經(jīng)干細(xì)胞；通絡(luò)救腦注射液在一定濃度范圍內(nèi)可以促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、自我更新，并可促進(jìn)其分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。可能是因?yàn)榇怂幬镉蓄惿L因子的作用或者通過刺