結腸癌細胞中CacyBP-SIP核轉位后其下游信號分子的篩選.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：在結腸癌中，鈣周期素結合蛋白（CacyBP/SIP）的入核可以促進結腸癌的發(fā)生發(fā)展，在人結腸癌 SW480細胞中，篩選出 CacyBP/SIP核轉位后與其相互作用的蛋白質。
　　方法：構建 pGC-FU-CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences慢病毒載體并且包裝慢病毒上清，之后用病毒上清感染人 SW480細胞，Western blotting方法用來檢測感染病毒后SW480細

2、胞中融合蛋白CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences和內源性 CacyBP/SIP的蛋白表達情況。串聯親和層析法和免疫沉淀法被用來純化與靶蛋白 CacyBP/SIP相互作用的下游蛋白復合物，之后行質譜分析蛋白復合物的具體組成成分并分析數據結果。
　　結果：CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences慢病毒包裝成功，病毒滴度為2×108

3、TU/mL。Western blotting方法從蛋白水平上證實了融合蛋白 CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences在人 SW480細胞的細胞核中的正確表達。串聯親和層析方法并未篩選與 CacyBP/SIP相互作用的下游信號分子，但是從免疫沉淀法篩選的蛋白復合物質譜數據分析：肌動蛋白可能是與 CacyBP/SIP相互作用的一個有意義蛋白分子。
　　結論：
　　1.成功包裝 C

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