幽門螺桿菌的培養(yǎng)方法及其在人工模擬環(huán)境中生存狀況的研究.pdf

1、幽門螺桿菌(簡稱Hp)是慢性胃炎的致病菌,與消化性潰瘍和胃癌的發(fā)生密切相關(guān),然而對于其傳播途徑的研究還不是很清楚。近年來提出受污染的水和食物可能作為載體傳播幽門螺桿菌,但缺乏有力證據(jù)支持,仍不清楚其在環(huán)境中的生存情況。本研究擬用燭缸法培養(yǎng)幽門螺桿菌(NCTC11637),并選出最適培養(yǎng)基;將幽門螺桿菌接種到人工模擬的四種實驗室環(huán)境中,觀察幽門螺桿菌在不同環(huán)境中的生存狀況。
　　第一部分:幽門螺桿菌培養(yǎng)方法的建立和培養(yǎng)基的比較

2、>　　目的:建立幽門螺桿菌的實驗室培養(yǎng)方法,并選出該實驗條件下最優(yōu)的培養(yǎng)基。
　　方法:采用燭缸法對幽門螺桿菌進行復蘇,對菌種進行鑒定并保存。將相同菌量的幽門螺桿菌接種到不同培養(yǎng)基上,培養(yǎng)5天后,檢測并計算細菌數(shù)量,選出本實驗最優(yōu)的培養(yǎng)基。并將不同稀釋度菌液接種到最優(yōu)培養(yǎng)基上,觀察其培養(yǎng)效果。
　　結(jié)果:本實驗采用燭缸法成功復蘇幽門螺桿菌,鑒定為幽門螺桿菌陽性。四種固體培養(yǎng)基上幽門螺桿菌生長情況存在差異,本實驗最優(yōu)的培養(yǎng)基為

3、添加7％新生牛血清的布氏瓊脂,有較好的分離培養(yǎng)效果。
　　結(jié)論:本實驗室采用燭缸法成功培養(yǎng)復蘇幽門螺桿菌;在該條件下最優(yōu)的培養(yǎng)基是添加7%新生牛血清的布氏瓊脂,有較好的培養(yǎng)效果,能夠用于下一步實驗從環(huán)境樣本中分離培養(yǎng)幽門螺桿菌。
　　第二部分:幽門螺桿菌在人工模擬環(huán)境中生存狀況的研究
　　目的:研究幽門螺桿菌在不同環(huán)境中的生存狀況。
　　方法:實驗室模擬純水、牛奶、豬肉末和胡蘿卜四種環(huán)境樣本,將幽門螺桿菌接種到2

4、5ml(g)樣本中使菌液濃度約為106cfu/ml(g)。樣品分別放置于室溫和4℃,在不同時點采樣從樣品中分離培養(yǎng)幽門螺桿菌,并染色觀察其生存狀況。
　　結(jié)果:幽門螺桿菌在四種模擬的環(huán)境中均不能生長繁殖,僅能存活一段時間,一段時間后無法分離。幽門螺桿菌在4℃環(huán)境中的存活時間長于室溫,顯微鏡下觀察細菌形態(tài)逐漸由桿狀轉(zhuǎn)變成圓球體。比較不同環(huán)境介質(zhì),幽門螺桿菌在牛奶中的存活時間最長,4℃超過10天,室溫超過6天。在豬肉末中的存活時間,4

5、℃中超過6天,室溫能存活3天以上。幽門螺桿菌在4℃水中存活超過5天,而2天后就不能從室溫的水中分離。在胡蘿卜樣本中的存活時間是四種環(huán)境中最短,4℃和室溫都僅能存活數(shù)小時,一天后均不能從胡蘿卜樣本中分離培養(yǎng)出幽門螺桿菌。
　　結(jié)論:幽門螺桿菌在環(huán)境中不能生長繁殖,僅能存活一段時間。顯微鏡下觀察幽門螺桿菌逐漸轉(zhuǎn)變成不能培養(yǎng)的圓球體。在環(huán)境溫度和菌液濃度相似的條件下,幽門螺桿菌在牛奶中生存時間較長,故牛奶可能是幽門螺桿菌傳播的重要媒介,