2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討NF-κB在FⅦa-TF/PAR2促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620細(xì)胞增殖、遷移中的作用;進(jìn)一步分析該過程中NF-κB的上游分子及其調(diào)控的效應(yīng)分子。
   方法:(1)采用Western blotting檢測PAR2激動劑(PAR2-AP)、凝血因子Ⅶa(FⅦa)、抗-PAR2抗體(α-PAR2)、抗-TF抗體(α-TF)等不同組合刺激SW620細(xì)胞后,細(xì)胞漿IκB-α、細(xì)胞核NF-κB(p65/RelA)的表達(dá)變化,從而分

2、析PAR2-AP及FⅦa對SW620細(xì)胞IκB-α/NF-κB通路的激活影響以及FⅦa的效應(yīng)是否依賴細(xì)胞表面的PAR2和TF。(2)采用NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)、PAR2-AP、FⅦa等刺激物或抑制物處理SW620細(xì)胞,分別用MTT法、Transwell法和流式細(xì)胞儀觀察PAR2-AP、FⅦa對細(xì)胞增殖遷移和細(xì)胞周期時(shí)相分布影響以及PDTC對這些過程的干預(yù)效應(yīng)

3、。(3)以Western blotting檢測PAR2-AP、FⅦa刺激對SW620細(xì)胞表達(dá)ERK1/2及其磷酸化的影響;進(jìn)一步利用ERK1/2抑制劑(U0126)預(yù)處理細(xì)胞,觀察其對PAR2-AP、FⅦa誘導(dǎo)的IκB-α/NF-κB(p65/RelA)蛋白變化的干預(yù)效應(yīng),從而分析FⅦa-TF/PAR2引起IκB-α/NF-κB通路變化中,IκB-α/NF-κB的上游信號分子(4)SW620細(xì)胞經(jīng)PDTC、PAR2-AP、FⅦa等不同組

4、合處理后,以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測細(xì)胞TF、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、caspase-7mRNAs表達(dá),Xa生成法檢測TF活性,進(jìn)而分析NF-κB抑制劑對FⅦa-TF/PAR2調(diào)控TF、IL-8、caspase-7表達(dá)的干預(yù)作用。
   結(jié)果:(1)PAR2-AP(100μmol/L)、FⅦa(10 nmol/L)均能引起胞漿IκB-α蛋白表達(dá)降低、核NF-κB(p65/RelA)蛋白水平增高,且具有時(shí)間依賴性;α-PAR2及

5、α-TF均能明顯抑制FⅦa對細(xì)胞IκB-α/NF—κB(p65/RelA)蛋白表達(dá)的影響,而同型對照抗體mopc-21無此效應(yīng)。(2)PAR2-AP(100μmol/L)或FⅦa(10 nmol/L)均能促進(jìn)細(xì)胞活力、遷移能力增強(qiáng),使細(xì)胞S期比率升高,G0/G1期比率下降;PDTC能夠明顯削弱PAR2-AP、FⅦa對SW620細(xì)胞增殖、遷移及細(xì)胞周期分布的影響。(3)PAR2-AP(100μmol/L)、FⅦa(10 nmol/L)刺激

6、SW620細(xì)胞均可引起時(shí)間依賴的ERK1/2磷酸化水平增強(qiáng);ERK1/2抑制劑U0126能夠明顯干預(yù)PAR2-AP、FⅦa對細(xì)胞IκB-α/NF-κB(p65/RelA)蛋白表達(dá)的影響。(4)PAR2-AP(100μmol/L)、FⅦa(10 nmol/L)分別作用SW620細(xì)胞,能引起細(xì)胞IL-8、caspase-7、TF mRNAs水平及TF活性改變,而PDTC能夠明顯干預(yù)此效應(yīng)。
   結(jié)論:
   (1)在結(jié)腸癌

7、細(xì)胞株SW620細(xì)胞,FⅦa-TF/PAR2的活化能夠引發(fā)細(xì)胞內(nèi)IκB-α/NF-κB通路的激活。
   (2)NF-κB通路的激活對于FⅦa-TF/PAR2促進(jìn)SW620細(xì)胞增殖與遷移過程是非常必要的。
   (3)在FⅦa-TF/PAR2→IκB-α/NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中,ERK1/2是IκB-α/NF-κB的關(guān)鍵上游分子。
   (4)NF-κB激活后通過促進(jìn)TF和IL-8、抑制凋亡蛋白caspase-

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