2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩65頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、研究目的:
   近期國內(nèi)外研究顯示,抗磷脂綜合征(antiphospholipidsyndrome,APS)血栓形成的病理機(jī)制與血清中高滴度的抗磷脂抗體密切相關(guān),尤其是針對β2GPI的抗體,但是有關(guān)其血栓形成的機(jī)制仍未闡明。本課題組前期研究揭示,在anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物刺激人單核細(xì)胞株THP-1表達(dá)組織因子(tissuefactor,TF)的過程中,跨膜蛋白Toll樣受體4(Toll-likereceptor4

2、,TLR4)及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子能夠被誘導(dǎo)表達(dá)并參與細(xì)胞的激活作用,并且部分依賴膜聯(lián)蛋白Ⅱ(AnnexinA2,ANX2),成為抗磷脂綜合征(antiphospholipidsyndrome,APS)血栓形成的機(jī)制之一。本論文重點(diǎn)探討TLR4引發(fā)的信號通路中關(guān)鍵分子——核因子κB(nuclearfactorkappaB,NF-κB)和激活蛋白-1(activatorprotein,AP-1)在此過程中的作用及可能的調(diào)節(jié)機(jī)制。
  

3、研究方法:
   (1)利用實時定量PCR(Real-timequantitativePCR,RT-qPCR)檢測anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞或人外周血單核細(xì)胞TFmRNA的表達(dá),采用試劑盒檢測TF活性。
   (2)Westernblotting檢測anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物刺激THP-1細(xì)胞或人外周血單核細(xì)胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1表達(dá)及其磷酸化情況,并檢測ant

4、i-β2GPI/β2GPI刺激的時效性和特異性。
   (3)采用PDTC(NF-κB抑制劑)和姜黃素(AP-1抑制劑)預(yù)處理THP-1細(xì)胞,觀察其對anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)TF的干預(yù)作用。
   (4)采用MAPKs抑制劑SB203580(p38抑制劑)、U0126(ERK1/2抑制劑)、SP600125(JNK1/2抑制劑)預(yù)處理THP-1細(xì)胞,觀察其對anti-β2GPI/β2G

5、PI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1磷酸化的干預(yù)作用。
   (5)采用TLR4特異性抑制劑TAk-242預(yù)處理THP-1細(xì)胞,觀察其對anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1磷酸化的干預(yù)作用。
   研究結(jié)果:
   (1)Anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物(100μg/mL)能顯著增加THP-1細(xì)胞及人外周血單核細(xì)胞TFm

6、RNA水平及TF活性,與對照組比較差異顯著(p<0.05)。
   (2)Anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物(100μg/mL)能顯著增加THP-1細(xì)胞或人外周血單核細(xì)胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1磷酸化水平,并顯示時間效應(yīng),分別于刺激90min和60min時磷酸化最強(qiáng)。
   (3)PDTC(20μM)和姜黃素(25μM)分別單獨(dú)預(yù)處理THP-1細(xì)胞,均能明顯抑制anti-β2GPI/β2GPI對TF表達(dá)

7、的刺激效應(yīng)。而兩者聯(lián)合使用時沒有疊加效應(yīng)。
   (4)MAPKs抑制劑[SB203580(10μM)、U0126(5μM)、SP600125(90nM)]分別單獨(dú)或者兩兩聯(lián)合預(yù)處理THP-1細(xì)胞,單獨(dú)使用時均未能顯著抑制anti-β2GPI/β2GPI或LPS對NF-κBp65和c-Jun/AP-1的磷酸化;而任意兩種抑制劑組合[SB203580/U0126、SB203580/SP600125、U0126/SP600125]均

8、能顯著抑制anti-β2GPI/β2GPI或LPS對NF-κBp65的磷酸化,但只有SB203580/SP600125和U0126/SP600125兩組能顯著抑制c-Jun/AP-1的磷酸化。
   (5)TLR4抑制劑TAK-242(5μM)未能抑制anti-ββ2GPI/β2GPI對THP-1細(xì)胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1磷酸化的刺激效應(yīng),但是能明顯降低LPS對THP-1細(xì)胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1

9、的磷酸化。
   結(jié)論:
   (1)Anti-β2GPI/β2GPI刺激單核細(xì)胞株THP-1或人外周血單核細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)的核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和AP-1被誘導(dǎo)發(fā)生磷酸化,最終促進(jìn)細(xì)胞表達(dá)TF,可能是APS血栓形成的重要分子機(jī)制之一。
   (2)在anti-β2GPI/β2GPI誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞或人外周血單核細(xì)胞表達(dá)TF所涉及的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中,NF-κB和AP-1作為關(guān)鍵分子而發(fā)揮作用,TLR4及MAPKs為

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論